低血糖、高血糖和虾青素：体外阿尔茨海默病模型

摘要：阿尔茨海默病预计在未来 30 年内将增加到 3000 万人，糖尿病的发病率预计也会上升。高血糖症常见于糖尿病患者，低血糖症是胰岛素治疗的常见后果。先前的研究表明，阿尔茨海默病和糖尿病之间存在潜在联系。本研究旨在确定虾青素 (ATX) 是否可以防止淀粉样蛋白β (A β ) 斑块和低血糖或高血糖的复合作用导致的线粒体功能障碍。在 2 μM、5 μM、25 μM（低血糖组）、2 mM、5 mM（正常组）和 25 mM 葡萄糖（高血糖组）中检查生长模式、ATP 产生和 ROS 产生，然后用或不用处理ATX 或 A β. 当低血糖组和高血糖组用 ATX 治疗时，它们的生长模式要么与对照组相当，要么增加。ATX 和 A β处理的细胞显示出比单独用 A β处理的细胞增加的生长模式。单独β处理组的总体生长显着低于对照组 (p < 0.05)。低血糖组产生总体低水平的 ATP，而高血糖组产生高水平的 ATP。通过 MitoSox 测定法测定，用 A β培养的细胞表现出由 ROS 产生产生的低水平平均荧光，而 ATX 组实际上产生更高至正常水平的 ROS。在 A β存在下生长的细胞ATX 通常会产生比 A β基团更多的 ROS。因此，低血糖症和高血糖症似乎确实加剧了 A β对海马细胞的影响。ATX 治疗显示出增加细胞生长的前景，这促进了细胞对 ATP 的使用和 ROS 的产生。即使在存在 A β的情况下也存在这种增长，这表明 ATX 能够克服 A β的负面影响。

关键词

ATP 萤光素酶检测, ROS 产生, β 淀粉样蛋白,虾青素,糖尿病

一、简介

阿尔茨海默病 (AD) 是一种神经退行性疾病，涉及记忆力和心理功能的进行性丧失，2019 年影响美国约 580 万人 [ 1 ]。尽管这种疾病很普遍，但可用的治疗选择很少，并且没有治愈方法 [ 2 ]。AD 的一个标志是大脑中存在淀粉样蛋白 β 肽 (A β ) 沉积 [ 3 ]。已知A β肽可增加活性氧 (ROS) 的产生 [ 4 ] [ 5 ] [ 6 ]。β 1-42 _还显示增强胰岛素受体底物磷酸化，一种称为虾青素的抗氧化剂能够减少和逆转由海马中的淀粉样蛋白生成效应引起的认知和记忆缺陷 [ 7 ]。A β会增加 mDNA 突变的线粒体数量，从而导致更高的氧化应激 [ 8 ] [ 9 ] [ 10 ]。

ROS是由电子传递链末端的O 2部分还原产生的。当 O 2仅部分还原时，它会产生活性氧物质，例如超氧阴离子、过氧化氢和羟​​基自由基，从而改变蛋白质、脂质和核酸的结构并导致细胞死亡 [ 5 ] [ 11 ] .

ROS 的产生可能会因糖尿病 (DM) 典型的高血糖水平（高血糖症）的存在而变化。DM 是阿尔茨海默病的危险因素；将糖尿病相关机制与实际 AD 病理学联系起来 [ 12 ] [ 13 ]。有趣的是，低血糖和高血糖已被证明会导致 ROS 产生和认知功能障碍的增加 [ 14 ] [ 15 ]。触发高血糖的信号通路也通过增加 ROS、氧化应激、细胞死亡和坏死性凋亡在 DM 症状中发挥作用 [ 16 ] [ 17 ] [ 18 ]。由于氧化应激，1 型糖尿病的低血糖会损害工作记忆和长期记忆。19 ]。高血糖是 2 型糖尿病中 ROS 产生和其他损害的主要因素 [ 20 ]。

虾青素 (ATX) 是一种由水生微生物产生的类胡萝卜素，然​​后摄入海洋野生动物，包括鲑鱼、虾、龙虾和小龙虾。ATX 可以穿过血脑屏障并清除大脑中的 ROS [ 21 ]。ATX 确实在单次给药后 4 和 8 小时在海马体中积累，并随着时间的推移而增加 [ 22 ]。ATX 还被证明对 PC-12 神经元细胞中的 A β 1-42介导的毒性和低血糖状况具有神经保护作用 [ 14 ] [ 23 ]。在正常血糖水平下，发现 ATX 可改善由 A β引起的线粒体功能障碍[ 14]。本文着眼于 ATX 在降低神经元氧化应激方面的有效性，这取决于低血糖和高血糖条件下的 ROS 和 ATP 产生。

2。材料和方法

2.1。细胞培养

小鼠海马细胞系 (NE-4C) 连同 Eagle 最低必需培养基 (EMEM) 和胎牛血清白蛋白 (FBS) 购自 ATCC (CRL-2925)。EMEM 中添加了浓度为 0.99% 的 Pen Strep 以减少微生物生长。细胞解冻后，将 EMEM 和 Pen Strep 培养基与 FBS 混合至终浓度为 15%。在 37˚C 的水浴中制备和加热总共 20 mL 的培养基。然后将温暖的 EMEM/FBS 培养基以 1/10 的稀释度逐滴添加到细胞溶液中并混合。然后将细胞在 1K 下离心 5 分钟，去除上清液，将温热的 EMEM/FBS 培养基以 1/8 稀释度添加到细胞沉淀中并混合。细胞在 37˚C 下孵育，每两到三天更换一次培养基。一旦达到所需的细胞群，

2.2. 神经元分化

对于 ATP 和 MitoSOX 测定，将细胞解冻然后分化。使用浓度为 10 -7 M 的视黄酸 (RA) 完成神经元分化24 小时 [ 24 ]，然后在 37˚C 的温热 PBS 中洗涤细胞。在 24 小时视黄酸暴露期间，细胞在 37˚C 的培养箱中的 EMEM/FBS 培养基中生长。24 小时后，在 37˚C 下用温 PBS 洗涤细胞，并根据其条件组（G、GA β、GATX 或 GA β ATX）进行 2 µM、5 µM、25 µM、2 mM、5 mM的攻击和 25 mM 葡萄糖基团。将培养物暴露于上述组条件 24 小时，在 37°C 下用 PBS 洗涤，然后进行荧光素酶测定或 MitoSOX 测定。

对于 GA β或 GA β ATX 条件组，A β 1-42从 Sigma Aldrich 获得，然后溶解在无菌 DMSO 中以制备 0.5 mM 储备溶液。将 GA β和 GA β ATX 组中的细胞与 2 μMA β 1-42的浓度一起孵育24 小时。虾青素也从 Sigma Aldrich 获得并溶解在无菌 DMSO 中制成 0.1 μM 储备溶液。然后将细胞与浓度为 10 nM 的 ATX 一起孵育 24 小时。将 GATX 和 GA β ATX 组中的细胞与浓度为 10 nM ATX 的细胞一起培养 24 小时。

2.3. ATP 萤光素酶检测

用于该测定的细胞在 Eppendorf 管中生长。在低血糖条件下，由于从对照获得的结果，仅进行了两次攻击。根据暴露组，将细胞与它们的特定葡萄糖和/或处理暴露、2 μM A β 1-42一起孵育, 或 10 nM ATX 24 小时。测试了葡萄糖挑战和 ATX 暴露组的葡萄糖。这是由于与 ATP 浓度相比，这些组的发光非常小。使用来自 Sigma-Aldrich 的萤火虫灯笼提取物和来自 Sigma-Aldrich 的 ATP 水合物测量不同暴露组的细胞中的细胞内 ATP。将 100 μl 实验和对照样品在 95˚C 以上煮沸 3 分钟。然后将样品从沸水中取出并短暂冷却，并将煮沸的样品转移到闪烁瓶中。然后用 1 mL 双去离子水稀释该溶液。

在这些小瓶中的每一个中，都添加了萤火虫灯笼提取物。添加荧光素酶后，将样品盖上盖子并混合并在黑暗中放置五分钟。使用闪烁计数器进行测量，在宽带设置上具有 1 分钟读数。已知浓度的 ATP 用于标准曲线，以帮助计算每个样品中的 ATP 浓度。然后使用该标准曲线绘制 ATP 浓度以确定不同实验组之间的差异。

2.4. MitoSOX 检测

用于该测定的细胞在培养皿内的盖玻片上培养。将细胞暴露于10 -7 M 的RA 24小时以进行细胞分化。将 RA 添加到 EMEM/FBS 培养基中。孵育 24 小时后，用 37°C 温热的 PBS 洗涤细胞。根据暴露组，将细胞与它们的特定葡萄糖和/或处理暴露组条件、2 μM A β 1-42一起孵育, 或 10 nM ATX 24 小时。在细胞暴露期结束之前，5 mM MitoSOX 储备溶液由从 Thermo Fisher Scientific 获得的小瓶制成。在暴露期结束时，细胞在 37°C 下用温热的 PBS 洗涤，并在 37°C 下与 5 μM MitoSOX 溶液一起孵育 10 分钟。然后将细胞从培养箱中取出，在 37°C 下用温热的 PBS 洗涤 3 次，然后悬浮在温热的 PBS 中。然后使用荧光显微镜对细胞进行成像。通过 Image Pro 6 分析获得的图片。拍摄图像后，准备好盖玻片并安装在载玻片上。

2.5. 数据分析

使用 Image Pro 6 收集和分析数据以获得整个图像的平均荧光值，并对最亮的区域进行三点区域分析。通过单向方差分析比较葡萄糖和各种化学挑战的变化。p < 0.05 的 p 值被认为具有统计学意义。

3. 结果

测量和分析细胞生长、ATP 产生和 ROS 产生，以了解对照组和实验组之间的显着变化。下面介绍了2 μM、5 μM、25 μM、2 mM、5 mM 和 25 mM 葡萄糖在低血糖和高血糖条件下（G、GATX、GA β和 GATXA β ）的四组结果。

3.1。细胞生长

根据总盖玻片覆盖率的百分比评估细胞生长。这些盖玻片在生长过程中呈片状。不同葡萄糖组之间的细胞生长没有显着差异（图1（a）），但用Aβ处理的组中细胞生长减少（图1（b））。A β和 ATX 组比 A β组生长得更好，但与对照（葡萄糖）和葡萄糖 ATX 组相比仍然表现出生长困难。

3.2. ATP 检测——低血糖

荧光素酶萤火虫测定用于测量生长后的 ATP 输出。2 μM、5 μM 和 25 μM 葡萄糖暴露组的 ATP 浓度低于零 ATP 浓度标准，并将值校正为零。用葡萄糖攻击的细胞表现出明显不同的 ATP 输出值。与 2 mM G 和 5 mM G 的正常葡萄糖浓度相比，低血糖暴露组 2 μMG、5 μMG 和 25 μMG 的 ATP 生成水平非常低。

3.3. ATP 检测——高血糖

当比较仅葡萄糖组的 ATP 产量时，25 mM 葡萄糖组比 5 mM 组产生更多的 ATP。25 mM 葡萄糖组产生的 ATP 比 5 mM 组多 242.7%。含 ATX 的 25 mM 葡萄糖组比 5 mM 组多产生 255.8% 的 ATP。含 A β的 25 mM 葡萄糖组产生的 ATP 比正常葡萄糖组多 391.5%，在四个测试组（对照组、GATX、GA β和 GATXA β）中增幅最高。最后，用 A β和 ATX 处理的 25 mM 组表现出高 ATP 水平，但 ATP 产生的水平在 25 mM GATX 和 25 mM GA β之间下降团体。在 5 mM G 组中，5 mM 对照组产生最多的 ATP。在 25 mM G 组中，25 mM GA β组产生最多的 ATP。

3.4. MitoSOXAssay——低血糖

细胞在荧光显微镜上以 5 倍的强度成像。荧光的高输出表明高应力和高 ROS 输出。预计所有细胞都会发出荧光，因为任何经历细胞呼吸的细胞都会通过该过程产生一小部分 ROS，但该测定法确定细胞产生异常高或低量的 ROS。一些最低水平的葡萄糖产生最多的荧光，表明产生最多的活性氧，表明高压力。2 µMG 产生的荧光量最大。与正常葡萄糖组 5 mM G 相比，唯一显示显着差异的组是 5 µMG 和 25 µM 葡萄糖浓度。

图 1。在低血糖葡萄糖浓度下受到攻击的细胞表现出改变的生长。(a) 暴露于不同葡萄糖浓度的细胞在生长方面没有表现出显着差异。2 µM 和 5 mM G 组生长最好，而 5 µM G、2 mM G 和 25 µMG G 表现出较差的生长。(b) 暴露于 A β的细胞表现出生长减少，并且 2 mM GA β组生长最好。与 2 mM GA β组相比， 2 μM GA β组的生长略有下降，而 25 μM GA β和 5 mM GA β显示出显着的生长下降。(c) 暴露于 ATX 的细胞生长良好并显示出生长的统计差异。细胞暴露于 A β和 ATX，在所有葡萄糖浓度下都表现出增加的增长。与 5 μM 组相比， 2 μM GATXA β、25 μM GATXA β、5 μM GATXA β和 2 mM GATXA β表现出生长减少。(d) 与 2 mmG 和 5 mM G 组相比，低血糖组的 ATP 浓度水平非常低。对于 GA β、GATX 和 GATXA β组，只有 2 mM 和 5 mM 组产生的 ATP 浓度足够高，可以测量。(e)与 5 mM GA β组相比， 2 mM GA β组显示出降低的 ATP 浓度。(f) 2 mM GATXA β组的 ATP 浓度低于 5 mM GATXA β. (g) 对于 ROS 的产生，与 2 μMG 组相比，25 μMG 和 5 μM 组的荧光显着降低，这是最低的葡萄糖浓度并产生最多的 ROS。(h) 所有 GA β均显示 ROS 产生减少，并与 5 µM GA β进行比较，因为其 ROS 产生水平低至正常水平。2 µM GA β和 25 µM GA β的下降最为显着，而 2 mM 组则略有下降。(i) A β和 ATX 组在所有葡萄糖浓度下表现出较低水平的荧光和 ROS 输出。没有任何组在统计学上存在差异。2 μM GATXA β和 2 mM GATXA βROS产量最低。*表示与对照 (5 mM) 相比 p < 0.05。#表示与对照相比 p < 0.01。~ 表示 p < 0.05，与 2 µM 相比。^表示与 2 µM 相比 p < 0.01。

这些结果表明，不同葡萄糖组之间的细胞生长、ATP 产生和 ROS 产生是不同的。我们还探讨了葡萄糖浓度的另一个极端：高血糖或高血糖。以下结果来自用 5 mM 和 25 mM 葡萄糖水平处理四个实验组（G、GATX、GA β和 GATXA β ）。

3.5. MitoSOX 检测——高血糖

通过进行 MitoSOX (ROS) 测定和测量平均荧光来确定 ROS 的产生（图 2）。具有不同葡萄糖浓度、 Aβ和/或ATX的组的ROS产生不同。高血糖症

图 2。(a) 暴露于高血糖浓度的组产生更高的 ATP 浓度。25 mM G 比 5 mM G 产生更多的 ATP。暴露于 ATX 的高血糖组产生高 ATP 浓度。暴露于 A β的高血糖组产生了非常高水平的 ATP，因为 25 mM 组产生的 ATP 比 5 mM 组多 391.5%。暴露于 A β和 ATX 的高血糖组产生较低水平的 ATP。条形表示每个条件的标准误差。表示 25 mM 处理与其相应的 5 mM 等效物相比显着。表明 25 mM ATX 与 5 mM ATX 处理显着不同。(b) 25 mM 葡萄糖组中 ROS 的产生大大降低。5 mM 对照组比 25 mM 对照组产生更多的 ROS。与 5 mM GATX 组相比，25 mM GATX 组的 ROS 产生显着降低。与 5 mM GA β组相比， 25 mM GA β组的 ROS 产生略有下降。与 5 mM GATXA β相比， 25 mM GATXA β组的 ROS 产生大大降低团体。(c) 两个实验组的整体板覆盖率不同。高血糖对照组的增长低于其 5 mM 对应组。25 mM GATX 组的增长没有显着超过其 5 mM 对应组。25 mM GA β和 GA β ATX 组的生长均显着高于 5 mM GA β和 GA β ATX 组。表示 25 mM 处理与其相应的 5 mM 等效物相比显着。

组产生的 ROS 比正常葡萄糖组少 89.6%（图 2（b））。用 ATX 处理的 25 mM 葡萄糖组产生的 ROS 明显少于 5 mM ATX 组。用 A β处理的 25 mM 葡萄糖组产生的 ROS 比 5 mM A β组少 34.4%。用 ATX 和 A β处理的 25 mM 葡萄糖组产生的 ROS 比 5 mM ATX 和 A β组少 91.9%，但这种差异没有统计学意义。

在 5 mM 葡萄糖组中，对照组产生的 ROS 最多，与5 mM 对照相比， 5 mM GA β中观察到的 ROS 产生显着减少(p < 0.05)。在 25 mM 葡萄糖组中，A β组产生最多的 ROS，紧随其后的是对照组。总体而言，25 mM 葡萄糖组产生的 ROS 少于 5 mM 葡萄糖组。

4。讨论

本文试图探讨虾青素是否可以预防线粒体功能障碍，通过线粒体 ROS 输出观察到，以及通过 ATP 产生和细胞生长观察到的细胞活力。在用 A β处理的低血糖条件下，细胞产生非常低的 ATP 浓度，增加了 ROS 的产生，并减少了细胞生长。在 GA β ATX 组中引入虾青素表明 ATX 可以在这些条件下延长神经细胞活力。

三个低血糖组（2 µM、5 µM、25 µM）的结果各不相同。在严重低血糖 2 µM 葡萄糖暴露组中，暴露于 A β的细胞在 MitoSOX 测定中表现出生长减少和荧光减少。因此，细胞表现出减少的 ROS 产生，反映了对 A β的典型细胞反应。当暴露于 A β时，细胞表现出通过高水平的 ROS 产生观察到的线粒体功能障碍增加。细胞通常还表现出细胞功能降低，细胞生长降低和 ATP 产量降低。当 2 µM 葡萄糖暴露组同时暴露于 A β和 ATX 时，与 2 µM GA β相比，细胞生长增加，平均荧光也增加团体。这表明细胞可能没有死亡，但可能处于死亡过程中，因此 ATX 可能有助于在存在 A β的情况下延长神经元细胞的活力。没有对 GA β或 GA β ATX 组进行 ATP 测定，因为 G 和 GATX 组在 2 μM 时产生了非常低的 ATP 水平。这表明当葡萄糖水平非常低时，细胞产生的 ATP 水平非常低，可能是细胞功能所需的最低 ATP 量。

在 5 µM 葡萄糖暴露组中，细胞生长和 ATP 产生与 2 µM 暴露组非常相似。5 µM GATX 在不同葡萄糖 ATX 组中的 MitoSOX 测定中生长最好并产生最高的平均荧光平均值。异常高或低的 ROS 水平表明细胞应激，但在 5 µM 葡萄糖组中观察到的水平表明细胞正在蓬勃发展，并且可能具有更多功能性线粒体以产生正常的 ATP 水平。与 2 µM GA β暴露组类似，5 µM GA β攻击组再次显示出所有 5 µM 组中最低的生长。与 2 µM GA β相比，5 µM GA β显示出增加的平均荧光水平，表明细胞对细胞 A 的应激反应β。5 µM GA β ATX 组表现出增加的生长和平均荧光水平。这种平均荧光的增加以及因此产生的 ROS 可能是由于正常的 ATP 产生而不是细胞应激。

与其他两个高血糖组相似，25 µM 葡萄糖暴露组生长最少，产生的荧光也很少。这种荧光的降低可能是生长减少或细胞死亡增加的结果。与较低的葡萄糖浓度（2 µM 和 5 µM）以及非常低的 ATP 浓度和 ROS 产生相比，25 µMG G 组的生长最少。然而，25 µM GA β ATX 确实生长并产生了低至正常的荧光，这表明在三种低血糖条件下，将 ATX 添加到 A β暴露组中可防止 ROS 产生并促进细胞生长。

其他两个葡萄糖组（2 mM 和 5 mM）生长良好，但 2 mM GA β ATX 组表现出最低的 ATP 浓度和荧光产生（表明细胞存活并使用产生的 ATP）。5 mM GA β ATX 组表现出增加的生长、增加的 ATP 和正常的平均荧光水平。2 mM GATX 组在 2 mM 组中生长最好，并提供正常的 ATP 浓度和荧光产生总量。5 mM GATX 组表现出生长减少，ATP 浓度略有增加，荧光产生低。因此，5 mM GATX 细胞能够产生更多的 ATP 并因此产生更多的 ROS，但与葡萄糖暴露相比，ATX 组的线粒体功能障碍没有减少。2 mM GA β在 2 mM 组中，组生长并产生最多的 ATP 和荧光，表明在暴露于 A β后存在细胞应激。ATP 的产生表明细胞正在制造 ATP，这会增加 ROS 的产生，但细胞似乎没有使用这种 ATP。产生但未使用的 ATP 可能储存在囊泡中，这是未来研究中应探讨的问题。5 mM GA β组在 5 mM 组中表现出最低的生长、ATP 浓度和 ROS 产生。

由于葡萄糖的可用性增加，高血糖组表现出增加的细胞生长和 ATP 产生，但这种可用性也有助于增加 ROS。在 5 mM 葡萄糖组中，5 mM GA β组表现出最少的生长和最低的 ROS 产生，以及低 ATP 浓度。低 ROS 产生可能与较低的 ATP 产生率有关，低 ATP 和 ROS 水平表明在进行荧光素酶和 MitoSOX 测定时细胞已经死亡或正在死亡。在 5 mM 葡萄糖组中，5 mM GA β ATX 组 ROS 输出与 5 mM 葡萄糖对照没有统计学差异。这表明 5 mM GA β中的线粒体ATX 组的功能与对照组相似，使我们得出结论，ATX 可以保护神经元细胞免受 A β应激和线粒体功能障碍。样品的 ATP 浓度范围为 1 µM - 80 µM。

25 mM 高血糖组表现出相似的增长。25 mM GA β和 25 mM GATX 组表现出最多的生长，并且 25 mM GA β比其他组产生更多的 ROS，但两组之间的差异无统计学意义。ROS 的产生非常低，25 mM 组比 5 mM 组产生更多的 ATP，这与细胞可用的葡萄糖量更大一致。尽管葡萄糖组之间存在这种差异，但 25 mM 葡萄糖组之间没有一个在 ATP 方面表现出显着差异。

5。结论

本文的目的是证明阿尔茨海默病的体外模型可用于研究血糖浓度对虾青素作为抗氧化剂的能力的影响。在检查低血糖和高血糖情况时，我们注意到在本研究的低血糖部分，A β和低血糖共同导致 ROS 产生增加，可能是通过增加线粒体功能障碍。虽然 ATX 可能有助于减少 ROS 的产生和增加细胞的生长，但其效果在葡萄糖浓度之间并没有很大差异。其中 GA βATX 组，细胞生长并产生 ROS。可能需要进行额外的研究来探索负责产生 ROS 的细胞数量。需要进行细胞计数和细胞测定。我们的实验室将继续进行细胞死亡检测，以测试细胞是否有活力。本研究的高血糖部分表明 ATX 确实对 A β具有神经保护作用，并且可以改善线粒体功能。

因此，我们的实验室已经证明虾青素在体外在低血糖、正常葡萄糖和高血糖溶液中以及在受到 A β攻击时能够促进细胞生长。因此，本研究中提供的数据支持 ATX 在促进正常、DM（低血糖和高血糖）和 AD（Aβ）疾病状态下的细胞生长中的作用。该数据还支持最近证明 ATX 的神经保护作用的大鼠模型研究。ATX 已被证明以浓度依赖性方式促进海马中的成年海马神经发生，并增加小鼠模型中的空间记忆 [ 25 ]。ATX 已被证明可以减少糖尿病小鼠的炎症和认知缺陷 [ 26]。ATX 已被证明对海马胰岛素抵抗具有神经保护作用，这是 DM 患者的一个考虑因素。因此，我们的研究支持该领域先前的研究，呼吁进一步调查使用 ATX 作为阿尔茨海默病的潜在治疗方法。

致谢

这笔赠款部分得到了鲍尔州立大学 ASPiRE 补助金和鲍尔州立大学本科荣誉学院奖学金的支持。

利益冲突

作者声明与本文的发表没有利益冲突。

参考

[ 1 ] 阿尔茨海默病协会 (2019) 2019 年阿尔茨海默病事实和数据。阿尔茨海默氏症和痴呆症，15，321-387。

[ 2 ] Canter, R.、Penney, J. 和 Tsai, L. (2016) 恢复神经回路治疗阿尔茨海默病的道路。自然，539、187-196。

[ 3 ] Cooper, E. 和 Ma, M. (2017) 阿尔茨海默病：来自传统和补充医学的线索。传统和补充医学杂志，7，380-385。

[ 4 ] Leuner, K., Schütt, T., Kurz, C., Eckert, S., Schiller, C., Occhipinti, A., Mai, S., Jendrach, M., Eckert, G., Krusa, S., Palmiter, R., Brandt, U., Dröse, S., Wittig, I, Willem, M., Haass, C., Reichert, A. 和 Müller, W. (2012) 线粒体衍生的活性氧导致增强β淀粉样蛋白的形成。抗氧化剂和氧化还原信号，16, 1421-1433。