建议的关于痴呆症的两个假设（“抗胆碱能假设”和“颅骨骨骼肌假设”）和治疗剂
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御姐音
大叔音
萝莉音
型男音
摘要：本研究的目的是进一步发展胆碱能假说，而不是使用流行的淀粉样蛋白斑块假说或 tau 蛋白假说来治疗痴呆症。该实验是在使用抗胆碱能药物东莨菪碱和比哌立登的小鼠身上进行的，以研究痴呆症的根本原因。首先，我们在给予东莨菪碱和比哌立登后用液相色谱-串联质谱 (LC-MS/MS) 测量小鼠血清，发现体内抗胆碱能药物代谢物的积累。Y-迷宫试验和颅骨骨骼肌细胞中 LC-MS/MS 的测量表明，东莨菪碱代谢物对颅骨骨骼肌有显着影响，从而得出美索巴莫是治疗痴呆症的有效方法的结论。
关键词
痴呆症,阿尔茨海默病,抗胆碱能药,东莨菪碱,美索巴莫, Ymaze ,骨骼肌
一、简介
胆碱假说的进一步发展
目前，关于阿尔茨海默病等痴呆形式的研究没有进展。缺乏进展的一个主要原因是，对流行的β淀粉样蛋白和tau蛋白假设的研究尚未建立有效的治疗策略。
结果，一家大型制药公司也停止了他们的研究。
这背后的一个明显原因是目前的研究已经停滞不前，但其他主要因素之一是没有发现新的假设。
目前，唯一公认的治疗方法是胆碱酯酶抑制剂，例如由 Hachiro Sugimoto 教授等人开发的 Aricept。[ 1 ]。
虽然 Hachiro Sugimoto 教授支持胆碱假说，但他意识到这不是一种确定的治疗方法，并继续研究新的治疗药物 [ 2 ]。
因此，作者根据许多文章 [ 3 ] [ 4 ] [ 5 ] 考虑在小鼠中检验抗胆碱能药物会导致痴呆。
本实验的目的是确定导致痴呆的抗胆碱能代谢物在小鼠体内积累了多少，并根据Y迷宫实验识别和确定治疗剂。
因此，用LC-MS/MS分析了用抗胆碱能药物治疗的小鼠的血清，用东莨菪碱和美索巴莫给药的小鼠的Y-迷宫实验和颅骨骨骼肌的LC-MS/MS分析。
2. “抗胆碱能假说”和“颅骨骨骼肌假说”的建议
2.1。抗胆碱能假说
到目前为止，像 Aricept 这样的胆碱酯酶抑制剂是唯一公认的阿尔茨海默病治疗药物。由于这一事实，胆碱假说已成为一个极其合理的理论。
然而，众所周知，这种药物只能延缓阿尔茨海默病的进展，而不是最终的治疗方法。
在本文中，作者介绍了进一步发展胆碱假说的概念。
尽管有抗胆碱能药物导致痴呆症状发展的报道，但细节尚未阐明。
然而，越来越多的论文表明抗胆碱能药物是痴呆症的原因 [ 3 ] [ 4 ] [ 5 ]。
于是，作者得出结论，抗胆碱能药物或其代谢物在体内的蓄积使乙酰胆碱失效，结果乙酰胆碱似乎有所减少。
目前，不仅是处方药，市面上的肠胃药、鼻炎药、眼药水、抗晕车药等多种非处方药也含有抗胆碱能药物。
当定期或连续服用抗胆碱能药物或其代谢物时，它们在体内循环或积聚并不少见。
因此，可以假设当超过累积阈值时出现痴呆症状。
特别是，据说“你必须记住，当你变老时，很可能会发生药物的生物蓄积”[ 6 ]。
此外，作为代谢物积累的例子，吗啡虽然不是痴呆，但由于代谢物的积累，吗啡很可能会引起意识障碍、谵妄等副作用[ 7 ]。
在本实验中，我们使用比哌立啶和东莨菪碱作为抗胆碱能药物。
此外，东莨菪碱是一种典型的药物，用于在 Y 迷宫测试等中测量小鼠的认知功能 [ 8 ]。
同样，比哌立登是一种用于帕金森氏症和类似疾病的药物 [ 9 ]。
2.2. 颅骨骨骼肌假说
在当今时代，人们认为痴呆症是一种大脑疾病，但作者认为，在痴呆症中，其他部位也存在问题。
像这个假设一样，有许多理论认为痴呆症的原因不是大脑。据他们说，据说由于牙周病和真菌等感染以及肠道菌群的差异，痴呆症的风险会增加 [ 10 ] [ 11 ] [ 12 ]。
根据这一假设，其他也受到影响的重要部位是颅骨骨骼肌。
颅骨骨骼肌是指额肌、颞肌、颅外肌、枕肌、咀嚼肌及其颅脑膜和神经。
头痛的原因并非直接来源于大脑，头皮神经痛也是原因之一，因此认为颅骨骨骼肌等也属于大脑的一部分是恰当的[ 13 ]。
冷刺激性头痛也是如此。
换言之，在颅骨骨骼肌中，乙酰胆碱等神经递质在身体处于健康状态时功能良好，但在痴呆状态下其功能受损。
由于低等动物的大脑还不够发达，人们认为它们的大脑，包括颅骨骨骼肌，作为一个整体发挥作用。然而，由于人类的大脑高度发达，我们的颅骨骨骼肌不需要像大脑一样发挥作用。也就是说，在人类中，颅骨骨骼肌已经像“盲肠”一样退化，在正常生活中完全没有功能，甚至没有被注意到。
因此，很难将这部分确定为疾病的原因。
此外，这也是一般中枢神经系统疾病没有治疗方法的原因。
假设动物的本能由翼外侧肌控制，动物的智力由大脑控制。
而且，连接两者的是颅骨骨骼肌和神经。
但在人类中，本能并没有实现，因为颅骨骨骼肌功能已经退化。
其影响的一个典型例子是出生率急剧下降。
此外，我们猜测“释迦牟尼的启示是，人类的思维如何通过意识到这些未使用的颅骨肌肉而改变”。
3. 测试样品
将试剂口服给药（每天一次）给小鼠，然后使用提取的血液中的血清进行实验。
使用的小鼠是 10 周大的雄性小鼠。
这在表 1中列出。
以下小鼠用于Y迷宫试验和颅骨骨骼肌分析，所有小鼠均经口给药。
用于 Y 迷宫测试的小鼠是 4 周大的雄性小鼠。
用于收集额肌的小鼠是 10 周大的雄性小鼠。
这在表 2中列出。
本研究中使用的试剂列于表 3中。
实验一和实验三的LC-MS/MS条件如下[ 14 ]：
LC-MS/MS 测量条件；
LC/MS/MS；
样品编号
给药试剂
星期一。
周二。
星期三。
星期四
星期五。
采血时间
1
东莨菪碱
●▲
给药后 30 分钟
2
1毫克/公斤
●
▲
24 小时后管理
3
●
●
●
●▲
末次给药后 30 分钟
4
●
●
●
●
▲
最终给药后 24 小时
5
比哌立登
●▲
给药后 30 分钟
6
1毫克/公斤
●
▲
24 小时后管理
7
●
●
●
●▲
末次给药后 30 分钟
8
●
●
●
●
▲
最终给药后 24 小时
表 1。抗胆碱能药物接种法。
● 药物管理，▲ 采血
样品编号
(Y-迷宫)
东莨菪碱
(1毫克/公斤)
美索巴莫
(461毫克/公斤)
额肌
枕肌
（眼睛上方）
（后脑勺）
一个
－
－
A-1
A2
乙
给药前 30 分钟
－
B-1
B-2
C
给药前 30 分钟
给药前 24 小时 + 给药前 2.5 小时
C-1
C-2
表 2。Y迷宫试验的药物接种方法。
成分名称
制造商名称
产品名称
纯度、成分
东莨菪碱
富士和光
氢溴酸东莨菪碱正水合物
纯度 98.5%
比哌立登
联盟（台湾）
阿金顿
成分 1.0%
美索巴莫
英元
博拉辛
成分 76.9%
表 3。所用试剂的名称。
LC部分；
岛津制作所的知名度；
Naclai Tesque 分离柱 COSMOSIL 5C18-MS-II 2.0 mm ID × 150 mm；
流体 A 10 nmol/L 甲酸铵；
流体 B 甲醇；
流速 0.2 mL/min；
试验液体注射剂量 10 μL；
质谱/质谱部分；
岛津制作所 LCMS-8045。
4. 实验 1-小鼠血清的 LC-MS/MS 测量
4.1。实验方法
为了了解东莨菪碱和比哌立啶在体内发生什么样的转化，我们使用 LC-MS/MS 分析了 1 到 8 号血清样品。
小鼠的血清以下列方式预处理用于LC-MS/MS分析。
将甲醇水混合溶液(1:1) 990 μL 加入到精确10 μL 的血清中，制成稀释液。稀释后的溶液通过膜过滤器（0.20 µm），用作 LC-MS/MS 的测试溶液。
4.2. 实验结果
由分析得到的主峰面积比的比较如表4和表5所示。
以所有峰面积的最高分子量124.2为对照，峰面积值为100，与其他峰面积比进行比较。
4.3. 考虑
首先，在所有样本中的共同观察结果是，在相同的成分中未检测到小鼠摄入的东莨菪碱和比哌立啶。在体内，它们迅速转化为代谢物。
东莨菪碱
在样品 1 和样品 3 的比较中，样品 1 的代谢物并不多，但样品 3 的代谢物数量较多。很明显，这种药物不仅需要连续摄入 1 天，而且需要连续 4 天才能在体内积累。
同样，样品 3 和 4 的比较显示两个样品中的代谢物水平相同。样品3的给药后30分钟的值和样品4的给药后24小时的值相同，表示持续摄取时蓄积量稳定。
样品 2 和 4 的比较显示样品 4 中的值更高。这表明持续摄入会导致积累增加的高风险。
比哌立登
在样品 5 和 6 的比较中，给药后 30 分钟的值
峰值分子量
非管理
1
2
3
4
124.2
100
100
100
100
100
149.15
-
5.54
11.42
13.59
14.74
171.25
-
-
5.29
5.65
5.66
181.2
-
-
5.49
6.69
7.22
199.25
-
-
5.79
6.26
6.41
205.25
-
-
6.64
7.58
7.86
217.2
-
-
7.11
7.69
7.67
219.25
-
-
-
5.01
5.11
228.3
-
-
6.54
7.52
7.59
259.25
-
-
-
5.28
5.32
273.25
-
-
-
5.26
5.33
274.35
-
-
-
-
5.04
277.2
-
-
-
-
5
282.35
-
-
-
5.27
5.94
316.25
-
-
5.46
6.32
6.64
338.45
-
5.92
12.83
15.92
16.68
358.45
-
-
5.29
6.09
6.26
361.35
-
5.68
11.34
12.2
12.37
391.4
-
-
-
5.44
5.67
404.35
-
-
6.67
7.48
7.66
419.45
-
-
13.98
18.88
21.29
420.45
-
-
-
6.32
7.09
425.35
-
5.02
12.87
15.07
16.19
441.3
-
-
-
5.36
5.65
475.5
-
-
7.01
9.39
10.69
497.45
-
-
7.09
7.12
6.96
表 4。东莨菪碱给药小鼠样品1至4的血清样品峰面积比的比较。
峰值分子量
非管理
5
6
7
8
124.2
100
100
100
100
100
139.2
-
6.14
5.74
6.19
6.13
149.15
-
16.44
11.42
17.73
17.4
171.25
-
5.76
5.29
5.72
5.7
181.2
-
8.07
5.49
8.67
8.46
199.25
-
6.52
5.79
6.6
6.53
205.25
-
8.59
6.64
9.01
8.85
214.2
-
-
-
5.09
5.05
217.2
-
8.04
7.11
8.11
8.03
219.25
-
5.28
-
5.42
5.28
228.3
-
8.13
6.54
8.24
8.04
259.25
-
5.54
-
5.59
5.64
273.25
-
5.58
-
5.85
5.47
274.35
-
5.17
-
5.19
5.08
277.2
-
5.08
-
5.04
5.03
282.35
-
5.39
-
5.86
5.79
316.25
-
7.07
5.46
7.17
7.36
338.45
-
18.44
12.83
18.79
18.01
358.5
-
6.41
5.28
6.7
6.49
361.35
-
12.97
11.34
13.08
12.74
391.4
-
5.9
-
6.09
5.85
392.4
-
-
5.56
-
-
404.35
-
8.15
6.67
8.22
8.13
419.45
-
24.36
13.97
26.97
26.31
420.45
-
8.26
-
9.1
8.69
425.35
-
17.63
12.87
17.68
17.18
441.3
-
6.1
-
6.22
6.14
475.55
-
12.29
7.01
13.74
13.68
476.5
-
5.14
-
5.46
5.38
497.45
-
6.24
7.09
6.64
8.02
表 5。比哌立登给药小鼠样品 5 至 8 的血清样品峰面积比的比较。
发现通常显着高于给药后24小时的值。这归因于当比哌立登仅服用一次时，比哌立登代谢物从体内排出。
样品 7 和 8 的比较没有显示任何一个样品的值有任何变化。这显示出与东莨菪碱相同的趋势。
样品 6 和 8 的比较表明样品 8 中的值更高。这显示出与东莨菪碱相同的趋势。
概括
东莨菪碱和比哌立登的实验结果表明，持续摄入这些药物会导致体内抗胆碱能药物的积累或循环量增加。
积累的代谢物被认为是痴呆症的主要因素。
5. 实验 2—Y 迷宫测试
5.1。实验方法
使用 A、B 和 C 型小鼠进行实验。
将小鼠置于Y形迷宫中，自由活动6分钟。由于小鼠有总是选择新路径的习惯，因此测量了进入 3 个臂中每一个的顺序和频率，并使用进入的数量与正确进入的数量之比来计算准确率，以评估进入的程度。记忆障碍 [ 15 ]。
5.2. 实验结果
根据从 Y 迷宫测试中获得的数据，分析了整体身体活动和行为改变中正确答案的百分比。
5.2.1。整体体力活动（频率）
总体体力活动数据见图 1和表 6。
结果依次为：东莨菪碱>不给药>美索巴莫+东莨菪碱（B>A>C）。
5.2.2. 改变行为的正确答案百分比 (%)
图 2和表 6显示了改变行为中正确答案百分比的数据。
结果依次为：未给药>美索巴莫+东莨菪碱>东莨菪碱（A>C>B）。
图 1。Y-迷宫测试中整体体力活动的比较。
图 2。Y-迷宫测试中改变行为的正确答案百分比比较。
类型
管理组
整体体力活动
行为改变中正确答案的百分比
一个
非管理
平均
44.3
70.7
标准差
3.6
4.2
与东莨菪碱相比
0.6101
0.0073**
乙
东莨菪碱
平均
47.3
49.3
标准差
4.2
3.5
-
-
-
C
美索巴莫
+ 东莨菪碱
平均
43.8
59.2
标准差
1.9
5.9
与东莨菪碱相比
0.4801
0.1931
表 6。Y-迷宫测试的结果。
N = 4。**发现显着差异。
5.3. 考虑
至于整体体力活动和行为改变的正确答案百分比，与东莨菪碱给药组相比，美索巴莫+东莨菪碱给药组的数值更接近正常状态（东莨菪碱非给药状态），表明美索巴莫抑制东莨菪碱的作用。
换言之，推测美索巴莫对痴呆症有效。
6. 实验 3—颅骨骨骼肌分析
6.1。实验方法
在Y迷宫试验条件下检查小鼠颅骨骨骼肌状况。
为了确认颅骨骨骼肌中东莨菪碱及其代谢物的存在，使用 LC-MS/MS 比较了来自 2 个部位 × 3 种类型的 6 个样品。
另外，A、B、C型小鼠的给药条件与实验2相同。
唯一的区别是这个实验使用了 10 周大的老鼠。
LC-MS/MS 的条件与实验 1 相同。
对于 LC-MS/MS 分析，使用以下方法预处理从小鼠收集的肌肉细胞。
每50mg小鼠颅骨骨骼肌丝加入0.2mL甲醇，匀浆3分钟。之后，通过离心过滤。将 0.2 mL 甲醇加入到残余物中并再次离心。此后，将滤液合并形成萃取溶液，将其注入LC-MS/MS系统。
6.2. 实验结果
下图分别显示了额肌和枕肌的 LC-MS/MS 分析结果。
以所有峰面积的最高分子量124.2为对照，峰面积值为100，与其他峰面积比进行比较。
这些数据列于表 7和表 8中。
6.3. 考虑
仅在 B-1 的额肌中观察到明显的结果，其峰值分子量为 340.45。这在 B-1 的枕肌中没有观察到。
出于这个原因，人们认为认知功能的损害主要发生在额肌中，这是由于
分子量
A-1
B-1
C-1
124.2
100
100
100
267.3
-
-
5.09
272.35
-
-
5.27
340.45
-
6.88
-
382.4
-
-
6.73
397.4
-
-
5.54
表 7。额肌峰面积比对照表。
分子量
A2
B-2
C-2
124.2
100
100
100
271.35
-
-
6.5
341.45
-
-
9.3
385.4
-
-
5.94
表 8。枕部肌肉峰面积比对照表。
大约 340.45，这是东莨菪碱代谢物的分子量。
此外，美索巴莫的存在似乎阻碍了 C-1 额肌中 340.45 分子量的积累。
7. 结论
基于这三个实验，我们做出了以下假设，可以概括为“痴呆的抗胆碱能假说”和“痴呆的颅骨骼肌假说”。
此外，我们建议将美索巴莫作为一种有效的治疗剂。
1) 抗胆碱能药物摄入后分解，一定时间后不再留在血液中。
2) 然而，一些抗胆碱能药物的代谢物即使在 24 小时后仍留在血液中。
3）它们逐渐在体内积累并随着时间的推移而增加。
4）它们积累的部位之一是颅骨骨骼肌。
5）这是阻碍神经递质乙酰胆碱作用的原因。
6）这最终导致痴呆。
7) 痴呆的病原体是抗胆碱能药物的代谢物，分子量约为 340.45。
8) 为了治疗痴呆症，这些代谢物的强制降解和强制体外消除将是必不可少的。
9) 美索巴莫是一种有效的痴呆治疗剂。
致谢
我们对同志社大学的客座教授杉本八郎和Green Tech Co., Ltd.的首席研究员奥田道明博士在开展这项研究过程中给予的广泛帮助和建议表示深深的感谢。
利益冲突
作者声明与本文的发表没有利益冲突。
参考
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[ 2 ] Sugimoto, H. (2018) 创造药物发现的奇迹。月刊 Isiyakusingaku，Genbunsha，2-7。
[ 3 ] Richardson, K., Fox, C., Maidment, I., Steel, N., Loke, YK, Arthur, A., Myint, PK, Grossi, CM, Mattishent, K., Bennett, K., Campbell, NL , Boustani, M., Robinson, L., Brayne, C., Matthews, FE 和 Savva, GM (2018) 抗胆碱能药物和痴呆风险：病例对照研究。英国医学杂志，361，k1315。
[ 4 ] Coupland, CAC, Hill, T., Dening, T., Morriss, R., Moore, M. 和 Hippisley-Cox, J. (2019) 抗胆碱能药物暴露和痴呆症风险：嵌套病例对照研究。JAMA内科。
[ 5 ] Prohovnik, I., Arnold, SE 等。(1997) 毒扁豆碱逆转东莨菪碱诱导的低额。脑血流与代谢杂志，17, 220-228。
https://journals.sagepub.com/doi/full/10.1097/00004647-199702000-00012#
[ 6 ] Onishi, A. (2008) 老年人的药代动力学特征。日本临床药理学和治疗学杂志，39。
[ 7 ] Sakurada, T.、Kawaguchi, H.、Eguchi, H.、Endo, K. 和 Tanaka, K. (2004) 评估吗啡在癌症疼痛中的最佳剂量。
