胆固醇或富含脂肪的饮食会加速成年海马神经发生的自然年龄下降，并对记忆和类似焦虑行为产生影响

摘要：饮食是一个重要的健康因素，最近与神经退行性疾病和认知能力下降有关。在这里，研究了富含脂肪酸或胆固醇的饮食对中年大鼠衰老相关的成年海马神经发生的生物学衰退可能加速的影响，及其对焦虑和记忆功能的影响。发现 10 周的饱和脂肪酸和胆固醇饮食对记忆功能有不利影响，表现出类似焦虑的行为，并减少六个月大大鼠海马中新生成的神经元的存在。

关键词

高脂饮食,高胆固醇饮食,成人海马神经发生,记忆力,类似焦虑行为

一、简介

神经退行性疾病和肥胖是我们当今面临的一些最大挑战。最近有人提出这两种现象之间存在联系，即肥胖和饮食习惯，这是神经退化发作的诱因；然而，这种关系背后的机制还没有很好地建立起来。有人提出，所谓的“西方饮食”的成分，如饱和脂肪酸和胆固醇，可能在这一现象中起重要作用。流行病学研究表明，居住在其民族家乡的日本人阿尔茨海默病 (AD) 的患病率低于居住在美国的人 [ 1 ]。与非洲裔美国人相比，尼日利亚非洲人也有类似的观察 [ 2]。这些观察结果有力地表明，工业化城市的饮食习惯和生活方式等环境因素可以促进大脑变化的发展。研究饮食诱导的大脑中脂质升高的参与及其与大脑改变的关系是很重要的。这是相关的，因为大脑是一个具有大量脂质和必需脂肪酸的器官，它们是从饮食中获得的。从饮食中获得的这些分子对大脑功能有重要的参与 [ 3]。另一方面，众所周知，很少有全身性胆固醇可以穿过血脑屏障 (BBB)，而脑胆固醇是原位产生的，它对大脑功能的参与至关重要。胆固醇参与髓鞘形成、膜结构和细胞信号传导等过程 [ 4 ]。流行病学研究表明，食用富含饱和脂肪的饮食与认知改变之间存在联系 [ 5 ] [ 6 ] [ 7 ]。此外，在动物模型中进行的研究表明，富含脂肪的饮食会对学习和记忆功能产生负面影响，[ 8]。富含脂肪或胆固醇的饮食会导致血清胆固醇和甘油三酯升高，并对中年大鼠的海马形态和记忆能力产生影响 [ 9 ] [ 10 ]。这些研究支持脂肪和富含胆固醇的饮食对海马功能的有害影响，并提出了一个问题，即脂肪或胆固醇摄入对海马体产生的有害影响是否会对成年海马神经发生产生影响。成人海马神经发生 (AHN) 是一种高度专业化的神经元可塑性类型，发生在海马齿状回中，据描述它可以响应不同的刺激而受到调节，从而使动物能够适应环境变化 [ 11 ] [12 ] [ 13 ]。AHN 与记忆功能有关，其损害会导致记忆灵活性的缺陷 [ 14 ] 和短期记忆的改变 [ 15 ]。据报道，一些食物成分可以调节神经发生过程的某些部分（综述见 [ 16 ]）。例如，富含脂肪的饮食可以减少年轻雄性大鼠在治疗 4 周后新生成的海马细胞数量 [ 17]。用高脂饮食喂养 17 周的小鼠在幼年个体海马齿状回中的未成熟神经元数量减少，导致关系记忆灵活性和空间辨别学习发生改变，表明青春期是有害影响的关键时期。成人海马神经发生中的高脂肪饮食。中年是成人海马神经发生的关键时期，因为众所周知，年龄是成人海马神经发生的自然下调，从 6 个月大开始，成人海马神经发生减少 [ 15 ] [ 18 ] [ 19]。这项工作的重点是评估在 AHN 自然减少的年龄喂食饱和脂肪酸饮食 (FAD) 或富含胆固醇的饮食 (CED) 的大鼠是否会增强海马神经发生的减少，从而恶化这些自然现象。目前的工作评估了在 10 周内食用这些类型的饮食是否会加速与衰老相关的神经发生衰退，并确定这些饮食是否会导致与年龄相关的认知衰退的增加。进行了新的物体识别记忆测试，以评估饮食治疗对记忆性能的影响。由于情绪障碍与老年人的有害认知能力有关，在这里，研究了脂肪或胆固醇摄入是否会对焦虑样行为产生影响。研究发现，长期食用富含脂肪或胆固醇的饮食会导致认知能力下降。这种效应与脂肪代谢和衰老有关，整个 AHN 减少，新生成的细胞数量减少，新生成细胞的复杂性发生变化，并影响个体的功能，改变记忆能力和焦虑的表达。喜欢的行为。

2.方法

2.1。动物

所有涉及动物受试者的程序均根据 CINVESTAV-IPN 指导的实验动物护理和使用的机构法规进行。协议批准是从机构动物护理和使用委员会（协议号 0081-14）获得的。为了进行研究，在实验开始时使用了25只5个月大的雌性Wistar大鼠。大鼠从机构动物设施 (IAF) 获得并分布在 3 组中。将动物保持在受控的光照、空气和湿度条件下，并随意接受食物和水。大鼠被随机分配到如下实验组：对照饮食（n = 8），脂肪酸饮食（n = 8），富含胆固醇的饮食（n = 9）。动物在 10 周时用不同的饮食喂养，其成分在表 1。每周记录体重。遵循所有机构和国际法规，以避免动物受苦并减少研究中使用的动物数量。

2.2. 血样和血脂谱

在第 0 周，所有动物都被带到实验室，并在麻醉室 (Vetequip Impac6) 中用 5% 异氟醚进行诱导麻醉和 3% 用于维持麻醉。一旦动物感觉到处于麻醉的作用下，就剃掉低爪并用插管从股静脉收集血液。血样与肝素一起保存在 Eppendorf 管中，并在室温下保存。在此过程之后，将动物放回笼子中，将血液样本离心并收集血浆用于进一步分析。研究的参数是：总胆固醇、甘油三酯、高密度脂类 (HDL) 和低密度脂类 (LDL)。样本被送往临床兽医实验室进行分析。

团体

表列头

饮食

作品

控制饮食

(Ctrl)

标准实验室饮食颗粒

10% 千卡脂肪

脂肪酸饮食（FAD）

富含脂肪酸的颗粒

饮食诱导的肥胖 (DIO) 成分，60 Kcal% 脂肪。（酪蛋白 200 克，3 克 L-半胱氨酸）（杰克逊实验室 D12492）。

富含胆固醇 (CED)

富含胆固醇的颗粒

啮齿动物模型中饮食诱导的动脉粥样硬化/高胆固醇血症，饮食 3，40 Kcal% 脂肪，1.25% 胆固醇（杰克逊实验室，D12108）。

表 1。颗粒的营养成分。

2.3. BrdU 注射液

到治疗的第 6 周，动物接受单剂量的 5-Bromo-2'脱氧尿苷 (BrdU) (50 mg/Kg 体重，B5002_SIGMA) 以标记海马齿状回中的增殖细胞。

2.4. 高架十字迷宫

为了分析饮食可能引起的情绪调节，在BrdU注射后第3周，用高架十字迷宫（EPM）试验对大鼠进行了测试。这是一种广泛使用的焦虑测试，它探索由系统发育决定的行为。它利用老鼠的自然厌恶来打开/高空间并测试动物如何应对水平压力源 [ 20 ]。该测试按照 Leal-Galicia 等人的报告进行，[ 15]。该设备是一个十字形的高架表面，其中两个臂由墙壁包围，两个臂是敞开的。将动物放在十字架的中心，面对封闭的手臂，并在那里自由探索 300 秒。低焦虑的动物会花更多的时间张开双臂。测量了开放臂和封闭臂之间的交叉次数，以及探索开放臂所花费的时间。

2.5. 新的物体识别记忆

为了测量我们的饮食治疗对记忆功能的影响，在 BrdU 注射后第 30 天进行了新物体识别记忆 (NORM)。该测试基于探索新项目的自然老鼠行为。它的优点是不需要以前的训练，并且不会在动物身上引起压力。此外，包括对新颖性的展示，这可能涉及新的海马生成细胞参与。NORM 测量啮齿动物区分先前遇到的对象与新对象的熟悉程度的能力。啮齿动物往往好奇并探索新事物，动物会更快地识别已知物体，并会花更多时间探索新物体 [ 21]。测试是根据 Leal-Galicia 等人先前报道的内容进行的，[ 15]。简而言之，测试分为三个阶段：习惯化、习得和识别。阶段之间有 24 小时的间隔。将大鼠单独移入实验室，并小心地放置在空塑料盒（39 cm - 55 cm - 65 cm）的中心，每只 5 分钟（适应期）。5分钟后，小心地将大鼠带回饲养室。对于采集阶段，将大鼠放置在与习惯阶段相同的盒子中，但包含两个等距的玻璃物体，一个是圆柱形的，另一个是菱形的。两者都具有非生物相关性并且同样具有吸引力。探索这些物体所花费的时间被记录下来。5 分钟后，小心地将大鼠带回饲养室，并用 10% 乙醇、5% 葡聚糖溶液清理物体，以避免任何气味参考。识别阶段在 24 小时后进行。在这个阶段，大鼠暴露在两个不同的物体上，而不是在采集阶段使用的物体。一种形状相同，另一种完全不同。时间探索已知和新的对象被注册。对象识别被评估为探索性指数，通过将探索新对象的总时间 (NO) 除以探索 NO 的总时间加上探索熟悉对象的总时间 (FO) 乘以 100 计算得出：NO/(NO + FO) × 100. 对一个对象的偏好对应> 50% index [22 ]。

2.6. 组织准备

为了分析 FAD 或 CED 摄入对海马成人神经发生的影响，记忆测试后 24 小时，用戊巴比妥钠深度麻醉动物并用 0.9% 盐水经心灌注。收集左下爪的表皮下脂肪以量化脂肪增加。获得大脑，并在由 4% 甲醛组成的固定溶液中后固定，在 0.1 M pH 7.4 的磷酸盐缓冲液中，然后转移到 20% 和 30% 蔗糖中（各 24 小时）。此后，将每个大脑切成 40 µm 连续冠状切片，并在冷冻保护剂溶液（25% 乙二醇、25% 甘油和 50% 0.1 M 磷酸盐缓冲液；v/v）4˚C 中保持自由漂浮。之后，每6个切片收集1个进行免疫组织化学处理，用于细胞增殖和细胞命运分析。分析的细胞标志物是用于量化新生成神经元数量的神经元迁移蛋白双皮质素 (DCX)、用于量化新生成成熟细胞数量的 NeuN/BrdU 和用于测量细胞增殖的 BrdU。简而言之，用 2 X PBS 仔细清洗自由浮动切片以去除冷冻保护剂溶液。对于 BrdU 和 DCX 染色，将切片与含有 0.6% H的溶液一起孵育 30 分钟2 O 2在 PBS 中封闭内源性过氧化物酶，然后用 TBS 冲洗 3 次，每次 10 分钟，然后用 0.9% NaCl 冲洗 2 次，然后在 2.5 HCl 中于 37°C 孵育 30 分钟。将组织在 PBS 中冲洗 4 次，然后在室温下转移到 PBS 中含有 10% 马血清和 0.2% Triton X-100 的封闭溶液中 1 小时。与一抗（Anti-NeuN 抗体 [1B7]-Neuronal Marker ABCAM (ab104224)1:500, SIGMA）或抗山羊 DCX 多克隆体（Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA, USA）1:250，稀释孵育在含有 3% 马血清和 0.2% Triton X-100 的 PBS 溶液中，在 4°C 下过夜。用 PBS 冲洗样品 3 次，每次 10 分钟，然后与二抗（抗小鼠 IgG 或抗山羊载体，Laboratories，Burlingame，CA）孵育 2 小时。2 O 2 , 0.04% NiCl, Vector Labs)。对于双免疫荧光，切片按照对 BrdU 的描述进行处理，并消除了内源性过氧化物酶消除步骤，此外，将二抗与荧光染料偶联以进行共聚焦分析。结束 BrdU 染色，进行 NeuN 染色（兔抗 NeuN 抗体，ABN78，默克）。阴性对照包括在程序中消除一抗。

2.7. 细胞命运分析

为了量化亚颗粒区和齿状回颗粒细胞层中 BrdU 和 DCX 阳性细胞的数量，使用传统的共聚焦显微镜对整个海马体前尾端范围内的荧光细胞进行计数。根据先前在 Kempermann 等人 [ 23 ] 中描述的方法采用光学解剖器​​方法。简而言之，收集每 6 个切片中的一个以通过针对 BrdU 和 DCX 的自由浮动免疫组织化学进行处理。进行免疫染色后（如前所述），将切片安装在盖玻片上，并在每个切片中对每个染色 BrdU 或 DCX 的细胞进行详尽计数。每只动物的BrdU阳性细胞总数乘以50阳性计数细胞数。

2.8. 统计分析

使用 GraphPad Prism 6 进行统计分析。由于行为数据不呈正态分布，因此使用 Kruskal-Wallis 检验和 Dunn 比较多重检验对数据进行分析，与生理测量相关的数据使用方差分析 (ANOVA) 进行分析然后在适当的情况下进行 Bonferroni 事后测试。当 p ≤ 0.05 时，统计显着性用符号突出显示；p≤0.01时2个符号；当 p ≤ 0.001 时 3 个符号；当 p ≤ 0.0001 时有 4 个符号。* 指与对照组相比，& 指与 FAD 组相比。所有值均以平均值 ± SEM 的形式给出，每种条件下 n = 8 至 9 只动物。对于体重与探索指数之间的关系，将每只动物的增重与其在探索指数中的得分进行比较。

3. 结果

3.1。FAD 导致体重增加

与对照组和 CED 动物相比，FAD 从治疗的第 4 周开始诱导雌性大鼠体重增加，并且这种差异一直保持到治疗结束 (F(10, 88) = 4.217, p ≤ 0.0001) (˚ C）。此外，与对照和 CED 处理相比，诱导表皮脂肪重量增加 (F(2, 22) = 3.576, p = 0.0452) (图 1 (b))。

3.2. FAD 和 CED 诱导脂质加工的变化

喂食 CED 的动物显示血浆中总胆固醇水平持续显着增加，在治疗结束时非常高（F(2, 20) = 35.76，p ≤ 0.0001 组显着性被视为#）（图2 (a) 视为#)。这种饮食还导致 LDL 和甘油三酯水平显着增加（F(2, 23) = 11.31, p = 0.0004 组显着性被视为 #）和 (F(2, 20) = 35.76, p ≤ 0.0001）（图2 (d) 和图 2(b) 组显着性分别被视为#)。喂食 FAD 的组在治疗的第三周显示血浆中总胆固醇水平显着升高。然而，在实验结束时，胆固醇水平与对照组中观察到的水平相似（F(2, 20) = 35.76，p ≤ 0.0001 组显着性被视为 &）。此外，这种饮食还会导致第三周时 LDL 水平升高（F(2, 21) = 4.1777，p = 0.0297 组显着性表示为 &），但不会引起血液甘油三酯水平的显着变化。在对照组中观察到总胆固醇和 LDL 水平持续增加，但这低于在 CED 组中观察到的水平（F(2, 21) = 9.730，p ≤ 0.0010 组显着性被视为*）。

3.3. 胆固醇饮食会导致焦虑样行为，FAD 和 CED 会导致短期记忆缺陷

EPM 是一种广泛使用的测试，用于评估啮齿动物应对较低压力源并利用大鼠自然探索行为的能力，

图 1。喂食 CED 或 FAD 的动物体重增加和表皮下脂肪增加。(a) 与对照组动物相比，FAD 使喂食此类饮食的大鼠的体重在 10 周内显着增加（视为 *） (b) 喂食 FAD 的大鼠的表皮下脂肪体积更高法爪，与对照组动物比较（视为*） (*) 与对照组比较。ANOVA p < 0.05 后的 Bonferroni 事后检验。

图 2. 摄入 FAD 或 CED 10 周后脂质处理失调。(a) 与对照组相比，服用 CED 后 3 周开始血浆中总胆固醇水平升高，并在第 10 周达到非常高的水平（被视为 #）。在 FAD 组中也观察到它（被视为 &）。(b) 从第 3 周开始，喂食 CED 的动物血浆样品中甘油三酯水平显着增加（被视为 #），这种效果不会因食用 FAD 而产生。(c) 在喂食这些饮食的大鼠的血浆样本中，没有证据表明食用 FAD 或 CED 可以调节 HDL 水平。(d) 从第 3 周开始，喂食 CED 和 FAD 的大鼠血浆中的 LDL 水平显着增加，到第 10 周显示出升高。(#) 将 CED 与对照组进行比较。(#, 等于 p < 0.05, #### 等于 p < 0。0001)。（&）FAD 与对照组相比）（&，等于 p < 0.05，&&&& 等于 p < 0.0001。ANOVA p < 0.05 后的 Bonferroni 事后检验）。

并且不需要以前的培训计划。众所周知，更好地处理压力源的老鼠，在这种情况下是一个开放的高架空间，会在张开的手臂部分探索更多的时间。与对照组或 FAD 相比，用 CED 喂养 10 周的雌性大鼠在张开双臂区域探索的时间更少（Kruskal-Wallis 检验，随后是 Dunn 的比较多重检验 α = 0.05），这表明存在类似焦虑的行为（图 3（一个））。EPM 是一项测试，要求动物具有适当的移动性才能正确执行，测量了手臂之间的交叉次数（打开和封闭），以消除观察到的交叉次数差异不相关流动性问题，并避免由于老化和超重而导致的错误结果。报告为手臂之间交叉次数的运动之间没有显着差异（图3（b））。动物在手臂之间移动相同，但 CED 组中的动物更喜欢封闭的手臂，这支持了 CED 治疗的动物表现出更高的焦虑行为的观点。换句话说，观察到的行为不是缺乏运动，而是偏爱探索“更安全”的封闭部分。

图 3。食用 FAD 或 CED 会促进行为改变。（a）CED 摄入会导致 EPM 中张开双臂的时间减少，但不会减少以臂间交叉次数衡量的运动，这表明 CED 的消耗会导致焦虑样行为（与对照组相比，视为 * ); (b) 用 CED 或 FAD 喂食雌性大鼠 10 周，降低区分新物体与已知物体的能力，报告为探索指数，这表明记忆改变（与对照组相比被视为 *。对于 EPM Kruskal-Wallis 检验，随后是 Dunn 的比较多重检验 α = 0.05，对于 NORM，ANOVA p < 0.05 后的 Bonferroni 事后检验）。

NORM 评估大鼠区分已知对象和新对象的能力，利用大鼠探索新事物的自然偏好。接近或低于 50% 的探索指数表明动物同样探索了已知物体和新物体，这表明大鼠不记得它们曾接触过已知物体。喂食 FAD 的大鼠的探索指数为 50.23%，这表明大鼠确实花费了相同的时间探索已知物体和新物体。喂食 CED 的大鼠的探索指数也接近 50% (54.32%)（图 3(b)) 这表明他们中的一些人对新对象的探索比已知对象略多，但仍小于探索指数为 71.08% 的对照组。这些结果表明，FAD 和 CED 会显着损害记忆性能。

3.4. FAD 和 CED 降低海马新生细胞的存活和分化

所有动物都接受了腹腔注射BrdU，这是一种胸苷类似物，可以标记S期细胞，并用于识别增殖期的海马神经元。为了标记新神经元的激活，在记忆测试前 30 天进行了 BrdU 注射，这是新生成的神经元能够发射的时间，可以通过 Activity-Regulated Cytoskeleton-associated protein 识别（弧）[ 24 ]。与对照组相比，喂食 CED 的大鼠的 BrdU 阳性细胞数量显着减少（F (2, 18) = 17.05, p ≤ 0.0001，图 4 (a)）。与对照组相比，FAD 组也观察到显着减少 (F (2, 18) = 17.05, p ≤ 0.0001,图 4（一个））。从中可以得出什么结论

图 4. FAD 和 CED 降低了新生海马神经元的存活和分化数量。(a) 喂食 FAD 和 CED 10 周的大鼠的海马齿状回 BrdU 阳性细胞总数减少（与对照组相比视为 *）；(b) 与对照组动物相比，喂食 FAD 和 CED 的大鼠海马的 DCX 阳性细胞数量显着减少（视为 *）；(c) 以及具有大过程的 DCX 细胞数量较少（与对照组相比被视为 *）；(d) 与对照动物相比，喂食 FAD 和 CED 的大鼠的齿状回中，成为完全成熟神经元的新生成细胞池减少（*，等于 p < 0.05，** 等于 p < 0.01，** * 等于 p < 0.001，*** 等于 p < 0.0001。ANOVA p < 0 后的 Bonferroni 事后检验。

这些数据表明，CED 和 FAD 诱导了神经元海马增殖细胞的下调。

此后，对成熟过程中的细胞数进行量化，为此，使用DCX标记。DCX 是一种细胞骨架蛋白，在迁移过程中的新神经元中表达 [ 25 ]。有人提出，这个未成熟细胞子集对于信息处理很重要[ 26 ]。观察到，与对照组相比，CED和FAD组DCX阳性细胞数均显着减少，CED显示出较低的值。与 FAD 组相比，CED 处理组的 DCX 阳性细胞显着减少 (F(2, 20) = 6.374, p = 0.0072) (图 4(b))。另一方面，除了 DCX 细胞数量减少外，细胞复杂性也发生了变化，以具有发达过程的细胞百分比来衡量 (F(2, 15) = 8.619, p = 0.0032,图 4 (c) ）。据观察，饮食治疗影响细胞分化，胆固醇饮食具有更强的作用。特别是在进入完全成熟阶段的新生成细胞的数量方面。NeuN 是一种存在于成熟颗粒细胞中的核细胞因子，BrdU/NeuN 的双重染色表明，用 FAD 或 CED 喂养中年大鼠可显着减少新生成的成熟海马细胞的数量 (F(2, 12) = 31.37，p ≤ 0.0001，图 4 (d))。

关于 ARC 表达，在整个海马轴上进行了详尽的搜索，并且在少数动物中仅发现了一些扩散细胞（数据未显示），因此可以得出结论，在这里进行记忆测试以及组织获得，没有可检测到的ARC细胞。

4。讨论

我们之前曾报道，食用富含饱和脂肪酸或胆固醇的饮食会导致年轻雄性大鼠体重持续增加 9 周。在目前的工作中，观察到雌性中年大鼠的体重明显增加，尤其是那些喂食 FAD 的大鼠。与对照组相比，这些大鼠的爪子中积累了更多的表皮下脂肪。脂肪堆积是肥胖的参考。肥胖被认为是多种神经精神疾病的诱因，例如抑郁症（综述见 [ 27 ]），并且有更多证据表明肥胖可能是患痴呆症的危险因素 [ 28 ]]。在这里，研究了 FAD 或 CED 在中年雌性大鼠中对成年海马神经发生 (AHN) 的年龄依赖性衰退的影响。Lindqvist 和他的同事之前已经表明，用 42% 脂肪（椰子油和玉米油）的饮食喂养 4 周的雄性大鼠表现出 BrdU 阳性细胞数量减少，脂肪组织没有增加，但皮质酮增加水平，这是一种压力荷尔蒙。这些结果发生在雄性大鼠身上，但没有发生在雌性大鼠身上，有趣的是；成熟新生成细胞的数量没有差异 [ 17]。相反，这里提供的结果表明，用 60% 脂肪（酪蛋白 200 g，3 g L-半胱氨酸）的饮食喂养 10 周的雌性大鼠确实增加了脂肪组织，减少了细胞增殖以及分化和完全成熟细胞的数量。海马体。有争议的数据可能是由于两项研究中使用的脂肪类型不同（椰子油和玉米油与酪蛋白和 L-半胱氨酸），也可能是因为大鼠菌株。此处提供的结果和 Lindqvist 表明，由于成人海马神经发生的减少，摄入富含脂肪的饮食可能不利于大脑可塑性，而摄入高脂肪饮食对整个海马区域产生不利影响. 卡尔沃-奥乔亚等人，[ 29] 报道了 7 天的饮食，辅以 10% 的猪油和含有 20% 蔗糖的饮用水，可降低海马重量，减少 CA1 中的树枝状树枝状结构，并降低微管相关蛋白 2 (MAP-2) 的水平，降低CA1中树突棘的数量和突触素含量。换句话说，食用高脂肪饮食对海马形态有不利影响。Boitard 等人。[ 30] 报道了 3 周龄小鼠的 DCX 细胞数量减少，其饮食由 24% (45% kcal) 脂肪组成，主要是来自猪油的饱和脂肪、41% (35% kcal) 碳水化合物、20% (17.5% kcal) 蔗糖，并且还显示了用径向迷宫评估的关系记忆的变化。此外，作者并没有发现同时喂食高脂肪饮食的 12 周龄小鼠的 DCX 阳性细胞数量存在显着差异。相反，这里观察到FAD组与对照组相比有显着差异，观察到DCX阳性细胞以及BrdU阳性细胞和完全成熟细胞减少。差异可能是由于饮食内容和动物品系造成的。这里展示的结果，首次描述了在海马神经发生自然减少的关键年龄期间，新生成的海马细胞中细胞进展三个步骤的变化：增殖、分化和成熟。当前研究中提供的数据表明，饮食习惯可能对海马神经发生产生影响，需要进一步分析以研究这种减少所涉及的分子机制。最后，成人摄入大量胆固醇和脂肪酸的有害影响可能会改变海马神经发生并导致认知能力下降的显着增加。当前研究中提供的数据表明，饮食习惯可能对海马神经发生产生影响，需要进一步分析以研究这种减少所涉及的分子机制。最后，成人摄入大量胆固醇和脂肪酸的有害影响可能会改变海马神经发生并导致认知能力下降的显着增加。当前研究中提供的数据表明，饮食习惯可能对海马神经发生产生影响，需要进一步分析以研究这种减少所涉及的分子机制。最后，成人摄入大量胆固醇和脂肪酸的有害影响可能会改变海马神经发生并导致认知能力下降的显着增加。

在这里还发现，两种饮食对记忆力都有不利影响，探索指数低于 50%，这意味着动物对已知物体和新物体的探索相同，这表明动物不记得已知物体。这些结果支持以前的报告，其中当大鼠或小鼠喂食 FAD 或 CED [ 8 ] [ 9 ] [ 10 ]时，几种类型的记忆会减少。AHN 是学习和记忆功能的重要组成部分 [ 14 ] [ 15 ] [ 31 ] [ 32 ] 并且随着年龄的增长而减少，但关于谁调节这种自然减少 [ 15 ] [ 18 ]知之甚少] [ 19]。与对照相比，消耗 FAD 或 CED 诱导的 BrdU 阳性细胞数量较少。此外，这些动物的神经元谱系细胞数量较少，细胞复杂性较差，这与对记忆性能的伴随影响有关。这些动物没有表现出记住先前提供的信息的能力。这种改变与海马功能密切相关，众所周知，这种认知障碍与年龄认知能力下降有关，并且是在痴呆认知改变中观察到的第一个特征之一。有趣的是，观察到喂食 CED 的动物表现出类似焦虑的行为。它可能类似于在中度认知障碍和痴呆早期阶段报告的情绪不稳定。目前调查的结果，表明 FAD 和 CED 的消耗有助于中年大鼠出现与痴呆相关的行为特征。它可能与血脂异常和海马中新神经元数量的减少以及新生细胞复杂性的改变有关。本研究报告的数据虽然是描述性的，但支持这样一种观点，即摄入富含脂肪或胆固醇的饮食是认知能力下降的危险因素，并可能导致痴呆症的发展。应进行进一步调查，以阐明此处描述的现象的分子机制。它可能与血脂异常和海马中新神经元数量的减少以及新生细胞复杂性的改变有关。本研究报告的数据虽然是描述性的，但支持这样一种观点，即摄入富含脂肪或胆固醇的饮食是认知能力下降的危险因素，并可能导致痴呆症的发展。应进行进一步调查，以阐明此处描述的现象的分子机制。它可能与血脂异常和海马中新神经元数量的减少以及新生细胞复杂性的改变有关。本研究报告的数据虽然是描述性的，但支持这样一种观点，即摄入富含脂肪或胆固醇的饮食是认知能力下降的危险因素，并可能导致痴呆症的发展。应进行进一步调查，以阐明此处描述的现象的分子机制。

致谢

作者感谢 CINVESTAV-Zacatenco 动物设施负责人 Jorge Fernández Hernández 博士的技术建议，以及 Julio Cesar Ramírez、María del Pilar Figueroa Corona 理学硕士和 Benjamín E. Chávez-Álvarez 提供的宝贵技术支持和 Ana Valencia - 来自伊利诺伊大学芝加哥分校的 Olvera，感谢语言修订和对论文的有益评论。

利益冲突

作者声明与本文的发表没有利益冲突。

参考

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