两种食用菌——平菇和裂褶菌提取物中蛋白质和氨基酸的比较

摘要：本研究旨在确定总蛋白质 (%) 和氨基酸谱，并对水和有机溶剂提取的蘑菇进行比较。提取物是由两种可食用的Pleurotus sajor - caju（商业）和Schizophyllum commune（野生）类型的 mu shrooms 制成的。用于萃取的四种溶剂包括 100% 水溶液、50% 乙醇、50% 甲醇和 50% 丙酮。采用Lowry比色法分析蘑菇提取物的真蛋白，采用高效液相色谱（HPLC）测定氨基酸。在P. sajor - caju和S. commune分别在水提取的P. sajor - caju蘑菇中测定了最高的总蛋白 3.43%。S. commune和P. sajor-caju的总氨基酸含量分别在 308.65 mg/g 至 443.84 mg/g 和 172.52 mg/g 至 400.76 mg/g 范围内。水提裂褶菌中总氨基酸含量最高，为443.84 mg /g，必需氨基酸含量最高为77.08 mg/g 。另一方面是必需氨基酸（EAA）的总含量。两种蘑菇的必需氨基酸以亮氨酸为主，其次是苏氨酸和丙氨酸，但含量最高的是从蘑菇的提取物中测定。 裂褶菌公社。与本研究中提取过程中使用的其他有机溶剂相比，水提取法对两种蘑菇的蛋白质成分和必需氨基酸均有效。

关键词

蛋白质,氨基酸,提取物,栽培,野生蘑菇

一、简介

蘑菇的营养价值与其高蛋白质含量密切相关。蘑菇是可与大豆和鸡肉相媲美的最佳蛋白质来源之一，因此是素食者的主要选择 [ 1 ]。众所周知，新鲜蘑菇含有大部分必需氨基酸 [ 2 ]。蘑菇蛋白的生物活性化合物由凝集素、功能性免疫调节蛋白、核糖体失活蛋白、核糖核酸酶和漆酶组成[ 3 ]。

Pleurotus sajor-caju和Schizophyllum commune是沙巴（东马）最可食用和最畅销的两种蘑菇，是当地美食。在当地语言中，P. sajor-caju被称为“cendawan tiramkelabu”，意为灰牡蛎蘑菇，S. commune被命名为“cendawan kodop”。这两种类型都是可食用的，但只有P. sajor-caju是由农学家在室内环境中使用处理过的培养基进行商业种植的，而S. commune通常不进行商业栽培，而是在橡胶木中自然生长，但生长取决于合适的环境条件，如温度、湿度和木材基质。这种野生蘑菇通常由人们采摘供当地食用。在雨季，裂褶菌公社资源丰富。除此之外，当地人还接受了蘑菇益处的教育，因为据报道它们具有抗肿瘤、心血管调节剂、免疫增强剂和抗氧化活性（与当地人的个人交流）等药理特性。野生食用菌因其药用价值而变得越来越重要[ 4]。一般来说，新鲜蘑菇含有高碳水化合物，其次是蛋白质，但脂质含量最少。P. sajor-caju中的碳水化合物含量为65.14% (DW) [ 5 ]，而S. commune蘑菇中的碳水化合物含量为 81.59% (DW) [ 6 ]。P. sajor-caju粗粉的粗蛋白含量比S. commune高（21.3%） [ 5 ]。另一方面，在栽培的P. sajor-caju中观察到较高的蛋白质含量，为 22.51% - 26.34%比从野生品种中获得的 14.55% - 20.67%。了解蘑菇中氨基酸的全面性和比例性对于了解特定物种总蛋白质的质量和数量很重要。某些氨基酸类苏氨酸、缬氨酸和苯丙氨酸在蘑菇中的含量与肉蛋白一样充足，而蛋氨酸和半胱氨酸在蘑菇蛋白中的含量较低。此外，蘑菇蛋白质中赖氨酸和色氨酸等氨基酸的含量与蔬菜中的蛋白质相当[ 7 ]。因此，了解野生蘑菇和栽培蘑菇的营养价值，即当地可用蘑菇中的氨基酸和总蛋白质是非常重要的。

提取是用于评估蘑菇研究中的生物活性化合物和抗氧化活性的常用技术之一。在提取技术中，热水提取、有机溶剂提取和碱提取等在这些化合物的提取中非常常见。研究人员不仅在寻找生物活性化合物，而且对评估产品产量的性能感兴趣 [ 8 ]。在P. sajor-caju中，使用沸水 (80˚C - 90˚C) 提取工艺，然后用 95% 乙醇沉淀 [ 9 ]，获得了 56% 的总多糖（粗提物）。在 121˚C 的高压灭菌水中提取的S. commune含有 29%（粗提物）的总多糖 [ 10]。用于沉淀的沸水和乙醇是上述研究人员报道的用于从蘑菇中提取多糖的常用溶剂。在P. sajor-caju磷酸盐缓冲液提取物中获得了 0.64 mg/mL（粗提取物）浓度的蛋白质 [ 11 ]。在P. sajor-caju水提取物中含有五种 EAA [ 12 ]，而在二氯甲烷提取物中含有八种 EAA [ 13 ]。另一方面，在S. commune粉中发现了 7 种 EAAs [ 14 ]，在P. sajor-caju干粉中发现了 8 种 EAAs [ 15 ]。到目前为止，关于蛋白质含量和氨基酸存在的信息有限S.公社提取物。已记录P. sajor-caju和S. commune蘑菇的氨基酸谱，但尚未报道蘑菇水提取物中所含氨基酸的信息。本研究旨在评估商业养殖的P. sajor-caju和野生品种的S. commune蘑菇的真实蛋白质和氨基酸，这些蘑菇是用水和三种有机溶剂提取的。

2。材料和方法

2.1。蘑菇准备

本研究采用商业栽培蘑菇Pleurotus sajor-caju和野生蘑菇Schizophyllum commune进行研究并在当地采集。新鲜采摘的 P. sajor-caju采自当地商业平菇农场（General Mushrooms Sdn. Bhd., Kundasan Sabah），而S. commune则从乡村周末市场（沙巴淡布南）的农民那里购买来自橡胶树林的野生品种蘑菇。新鲜蘑菇被带到实验室进行清洁和冲洗以去除碎片和昆虫。蘑菇切成2厘米2并放入烤箱中，温度为 40°C，直至完全干燥。然后使用食品加工机将干蘑菇混合成细粉并储存在带拉链的塑料袋中以供提取。

2.2. 萃取

萃取采用水相和三种有机溶剂，如50%乙醇、50%甲醇和50%丙酮。蘑菇粉和溶剂以1:10的比例在锥形瓶中混合均匀，用玻璃棒搅拌均匀。将烧瓶保持在恒温摇床中以 100 rpm 的速度摇动三天。然后将混合物以 5000 rpm 的转速离心 20 分钟以将液体与蘑菇碎片分离。收集提取的液体部分并用Whatman G/C滤纸过滤。滤液在 40°C 温度下用旋转蒸发仪浓缩。在冷冻干燥过程之前，将浓缩的提取物在 -80˚C 冷冻。冷冻干燥的提取物保存在带拉链的塑料袋中，不使用时在-20˚C 冷冻。

2.3. 真蛋白质的测定

使用改良的 Lowry 方法分析蘑菇提取物的真蛋白质 [ 16]。简而言之，从溶解在 10 mL 0.1N 氢氧化钠溶液中的 0.5 g 蘑菇提取物中进行蛋白质沉淀，并在振荡器中放置 8 小时。将混合物以 1000 rpm 离心 10 分钟，收集 5 mL 上清液。将 1 mL 20% 三氯乙酸加入上清液中，并在冰箱中 4°C 下储存过夜，以使蘑菇提取物蛋白完全沉淀。将带有沉淀的上清液以 1000 rpm 离心 20 分钟。弃去液体，将 5 mL 1N NaOH 添加到沉淀物中。取 0.5 mL 样品，加入 3 mL 蛋白质试剂并充分混合，进行显色。混合物放置10分钟。再加入 0.3 mL Folin 试剂，混合并等待 30 分钟。

2.4. 氨基酸测定

使用高效液相色谱 (HPLC) 氨基酸分析仪 (SHIMADZU，Lab10X 型) 对蘑菇提取物氨基酸进行分析，具体程序 [ 5]。使用 0.2 g 蘑菇粉末提取物在 8 mL 盐酸 (6N) 中在 110°C 下水解 24 小时。水解样品用 25 mL 双蒸水稀释。向等分试样 0.1 mL 中加入 0.8 mL 钠稀释剂和 0.1 mL DL-2-氨基丁酸 (AABA)。然后用膜盘式过滤器聚四氟乙烯 (PTFE) 过滤样品，用于分析。使用柱后衍生器（Pickering，模型实验室 PC​​X5200）用两种试剂，盐酸钠和邻苯二甲醛 (OPA) 衍生氨基酸分离。流动相由三种洗脱液组成，洗脱液 A 填充钠 (1700-0112)，洗脱液 B 填充钠 (Na 2OH) 和用色谱柱再生 (RG011) 填充的洗脱液 C。氨基酸定量使用紫外检测器，激发波长为 330 nm，发射波长为 465 nm。从 17 种已知氨基酸标准（天冬氨酸、苏氨酸、丝氨酸、谷氨酸、甘氨酸、丙氨酸、胱氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸、氨、色氨酸、精氨酸和缬氨酸）建立校准色谱图。氨基酸的价值以每克提取物的毫克数表示。

2.5. 统计分析

一式三份收集真实蛋白质和氨基酸的数据并计算平均值和标准偏差（SD）。使用 SPSS for windows（版本 21.0）对真蛋白的结果进行单因素方差分析（ANOVA）。真蛋白差异显着性采用Duncan's multiple range test判断。P值<0.05被认为具有统计学意义。

3. 结果

3.1。蘑菇干提取物产率 (%)

两种蘑菇的水提方法获得了最高的干提取物得率，在P. sajor-caju和S. commune中的百分比分别为 39.65 和 14.48。P. sajor-caju中产生的干提取物（25.62% 至 39.65%）与S. commune中获得的提取物量（9.20% 至 14.48%）相比高出两倍。在两种类型的蘑菇中，水提取在干提取物产量方面都观察到更有效（表 1）。

3.2. 蘑菇中的真蛋白质

P. sajor-caju和S. commune提取物的真实蛋白质值分别在 1.38% 到 3.43% 和 1.30% 到 2.17% 的范围内（表 2）。在P. sajor-caju和S. commune的水提取物中分别测定了 3.43 ± 0.32 和 2.17 ± 0.28 的最高值 (%) 。虽然在P. sajor-caju的所有提取物中获得了更高的真蛋白 (%) ，但除水提取样品外，没有观察到显着性 (P > 0.05) 差异。

3.3. 氨基酸概况

在Pleurotus sajor-caju和Schizophyllum commune蘑菇提取物中总共鉴定了 17 种氨基酸，但在物种内以及各种提取物中也观察到了差异（表 3）。从S. commune提取物中鉴定出所有九种必需氨基酸 (EAA) ，而在P. sajor-caju蘑菇提取物中仅发现七种 EAA。此外，在S. commune提取物中观察到的氨基酸含量最高，为 20.29% 至 31.62%，而P. sajor-caju中的氨基酸含量为 19.04% 至 20.34%提取物。两种蘑菇的水提物总 EAA 含量最高（8.95% ± 0.02%），特别是苏氨酸和亮氨酸贡献最高

溶剂

Pleurotus sajor-caju

裂褶菌公社

水性

39.65 ± 3.2

14.48 ± 1.2

乙醇

27.13 ± 2.0

10.11±0.9

甲醇

25.62±0.5

9.65±0.2

丙酮

26.50 ± 2.1

9.20 ± 0.9

表 1。每种提取溶剂的蘑菇干提取物产率 (%)。

水性

乙醇

甲醇

丙酮

Pleurotus sajor-caju

3.43 ± 0.32一个

1.76 ± 0.19b

1.38 ± 0.44b

2.06 ± 0.24b

裂褶菌公社

2.17 ± 0.28b

1.69 ± 0.24b

1.30 ± 0.35b

2.04 ± 1.03b

表 2。在水性和不同类型的有机溶剂提取后， Pleurotus sajor-caju和Schizophyllum commune中的真实蛋白质 (%) 含量

每行不同字母表示差异显着（P < 0.05）。

蘑菇

Pleurotus sajor-caju

精神分裂症公社

提炼

水性

乙醇

甲醇

丙酮

水性

乙醇

甲醇

丙酮

天冬氨酸

11.23±0.28

10.31±0.7

10.59 ± 1.10

12.86 ± 1.42

6.74±0.16

28.7±4.2

40.91 ± 0.71

22.84 ± 0.46

苏氨酸*

18.29 ± 0.89

7.88 ± 0.61

8.13±0.98

10.37 ± 1.66

24.4±0.40

13.13 ± 1.91

20.14±0.34

15.63±0.28

丝氨酸

9.00 ± 0.07

11.41±0.7

11.78 ± 1.32

11.52 ± 1.16

9.25±0.12

15.8±2.14

22.61 ± 0.39

16.58±0.31

谷氨酸

14.17 ± 0.37

77.67 ± 4.52

81.6±11.1

81.11 ± 8.72

111.49 ± 1.36

49.51 ± 7.36

64.93 ± 1.16

150.65 ± 2.55

甘氨酸

19.43±0.04

7.66±0.45

7.97 ± 0.96

9.83±1.12

24.14 ± 0.19

14.38 ± 1.95

21.70 ± 0.51

15.62±0.26

缬氨酸*

钕

钕

钕

钕

1.16±0.42

8.53 ± 1.42

16.62±0.89

8.44±0.19

丙氨酸

39.10 ± 0.43

18.17 ± 1.08

18.93 ± 2.28

23.46 ± 2.48

52.05±0.80

23.31 ± 3.36

32.99 ± 0.55

22.17 ± 0.38

胱氨酸

9.00 ± 0.08

4.39 ± 0.46

4.47±0.57

6.70 ± 2.04

23.47 ± 1.70

11.02 ± 1.35

20.03 ± 0.47

13.35±0.33

蛋氨酸*

3.38±0.34

0.80 ± 0.13

钕

1.80 ± 0.34

1.14±0.22

0.32±0.0

0.65±0.23

0.81 ± 0.03

异亮氨酸*

14.37 ± 0.19

3.93±0.17

4.11±0.48

7.04 ± 0.75

1.14±0.22

9.54±1.12

17.67 ± 0.23

9.45±0.16

亮氨酸*

24.2±0.02

8.1±0.48

8.38 ± 0.91

13.12±1.45

17.57 ± 1.13

16.91 ± 1.71

22.13 ± 7.88

14.81±0.36

酪氨酸

钕

3.19 ± 0.21

4.04 ± 0.41

5.73±1.38

1.02±0.17

3.10 ± 0.0

16.15 ± 28.73

1.97 ± 0.07

苯丙氨酸*

8.11±0.04

4.08±0.44

4.20±0.65

6.92±13.53

1.27±1.01

4.60 ± 6.36

1.34±0.27

2.70±0.1

赖氨酸*

8.36±0.74

11.20 ± 1.16

11.30 ± 1.31

10.7±1.15

7.14±0.11

14.00 ± 1.72

21.71 ± 0.79

13.72±0.3

组氨酸*

9.65±0.13

5.04±0.65

4.86±0.54

5.82±0.66

11.06 ± 0.81

4.60±0.54

6.67±0.45

6.03 ± .57

色氨酸*

钕

钕

钕

钕

1.48 ± 0.66

14.97 ± 9.27

0.75±0.33

1.40 ± 0.37

精氨酸

2.20 ± 0.06

0.43 ± 0.08

0.43 ± 0.08

0.76 ± 0.69

1.92±0.32

16.22 ± 1.74

20.06 ± 2.3

16.47 ± 0.46

总EAA

76.71

35.99

36.12

50.02

77.08

51.44

88.56

58.75

NEAA 总数

113.78

138.27

144.67

157.79

227.00

151.48

232.97

265.32

总氨基酸

172.52

182.68

430.53

400.76

443.84

308.65

417.82

408.14

表 3。Pleurotus sajor-caju和Schizophyllum commune不同溶剂提取物中的氨基酸含量 (mg/g)(平均值 ± SD; n = 4)。

Nd：未检测到；EAA：必需氨基酸 (*)。NEAA：非必需氨基酸。

EAA 总 EAA 组成。另一方面，在S. commune丙酮提取物中获得了 32.41% 的总 AA。

4。讨论

本研究中使用的不同萃取溶剂会影响萃取的产量，因为选择性的特征在于极性的不同强度 [ 17 ]。即使是使用相同的提取物或新鲜蘑菇观察到的变异也是不同栽培过程干燥温度和遗传变异的结果[ 18 ]。与有机溶剂相比， P. sajor-caju和S. commune的水提取物始终产生更高的产量，这可能是由于含有大量极性成分，如蛋白质 [ 12 ] 和抗氧化特性 [ 19 ]] 在蘑菇中。这两种蘑菇提取物的抗氧化和抗菌特性在其他地方报道，尽管在本研究中没有考虑。两种蘑菇的有机溶剂（乙醇、甲醇、丙酮）提取物的提取量均低于水提取物，但某些必需化合物的可提取性优于水提取物。多糖的产量、纯度、化学成分、分子量分布、微观结构和生物活性是提取方法和提取过程中使用的溶剂的结果[ 20 ]。提取方法非常具体，取决于特定研究的目标。产生 16.7% 至 19.5% 的甲醇提取物在脂质过氧化中观察到高抗氧化活性更有效[21 ]。然而，目前的研究也能够获得比野生蘑菇S. commune的商业物种中获得的提取率高 25.62% 的平均提取率。另一方面，观察到热水萃取比冷水萃取效率低，因为生物活性化合物可能会在高温下失去效力 [ 20 ]。此外，提取持续时间、使用的溶剂量和更高的温度被确定为阻碍了广泛的商业应用。因此，工艺优化对于获得特定用途组件的更好产量起着非常重要的作用[ 22 ]。在 20 mg/mL 提取物浓度以下未观察到这种蘑菇的甲醇提取物 [23 ]。虽然本研究中的水提法更有效，但野生S. commune的产量低于商业P. sajor-caju 的产量，这可能对其他种类的食用菌无效 [ 20 ] .

据报道， P. sajor-caju粉中所含的粗蛋白高于在Schizophyllum commune中测定的粗蛋白。一般来说，P. sajor-caju的粗蛋白含量为 21.3%（以干重计）[ 5 ]，而据报道，S. commune [ 6 ] 中粗蛋白的含量为 9.63%（干重）。另一方面，在商业栽培和野生采集的 P. sajor-caju中确定了变异。在栽培的P. sajor-caju蘑菇粉中观察到 22.51% - 26.34% 的粗蛋白高于从同一物种野生品种中获得的 14.55% - 20.67% 的粗蛋白 [ 15]。不同种类蘑菇蛋白质含量的变化取决于蘑菇菌株/类型、生长培养基的组成、收获时间、管理技术、处理条件和基质的制备 [ 24 ]。真蛋白是蘑菇中蛋白质的实际含量，而粗蛋白由氮含量组成，考虑到粗蛋白的价值，因为真蛋白可以高估包含非蛋白氮的蛋白质含量。显然，真正的蛋白质价值是蘑菇物种中含有粗蛋白质的结果。P. sajor-caju的磷酸盐缓冲液提取物含有 0.64 mg/mL 浓度的真蛋白 [ 11 ]，而银耳的甲醇提取物获得3.02%的蛋白质。在这项研究中，观察到水萃取是萃取中最好的。在P. sajor-caju和 S. commune 中分别测定了 17.14% 和 10.7% 的真蛋白。水提物是从蘑菇双孢蘑菇中提取蛋白质的常用液体提取方法[ 25 ]。然而，关于S. commune提取物中真正蛋白质的已发表数据是有限的。该研究还表明，与野生采集的蘑菇S. commune中测定的蛋白质相比，商业种植的 P. sajor-caju提取物具有更高的蛋白质表明栽培蘑菇中的最高蛋白质含量是由于与野生蘑菇相比，栽培蘑菇中使用的配制基质和补充培养基，其中衍生的营养取决于该特定野生环境中可用的自然条件[ 15 ]。

本研究共检测到15种氨基酸，而Schizophyllum commune粗提物中有17种氨基酸。但从新鲜的P. sajor-caju [ 5 ] 和S. commune [ 14 ] 的干蘑菇中共鉴定出 17 种氨基酸。另一方面，在野生P. sajor-caju蘑菇的水提取物中报告了 11 种氨基酸 [ 12 ] 少于本研究中确定的氨基酸。在S. commune中检测到所有九种必需氨基酸，但在P. sajor-caju提取物仅鉴定了七种 EAA。蘑菇物种中EAA 的波动和丰度受遗传因素（即物种和菌株）、发育阶段、采前和采后处理的性质以及生长基质类型的影响[ 24 ]。在P. sajor-caju水提液 [ 12 ] 中测定了 5 种 EAA，在二氯甲烷提取物中测定了 8 种 EAA [ 13 ]，在S. commune膳食中测定了7 种 EAA [ 14 ]。使用相同的提取物或新鲜蘑菇获得的 EAA 的变化是不同栽培过程的结果，也是由于干燥温度和遗传变异 [ 26]。

这项研究的水提取物被证明是总必需氨基酸组成中苏氨酸的最高分布。在P. sajor-caju提取物中，苏氨酸贡献了 24% 的必需氨基酸，而S. commune贡献了 32%。从蒸馏水中提取的P. sajor-caju蘑菇粉中获得 37% 的苏氨酸[ 12 ]。与蘑菇粉一样，水提取物可以更好地提取苏氨酸。在P. sajor-caju的干蘑菇中，苏氨酸和亮氨酸是主要的 EAA [ 27 ]。在这项研究中，亮氨酸、苏氨酸和赖氨酸是两种蘑菇提取物中最主要的 EAA。而亮氨酸和赖氨酸是S. commune中的主要 EAA. 在P. sajor-caju提取物中观察到色氨酸有限。这可能是由于P. sajor-caju中的色氨酸含量太稀少，如蘑菇粉中报道的那样，色氨酸是报道中最少的氨基酸，为 0.41% [ 12 ]。一般来说，谷氨酸是蘑菇中的主要氨基酸，在S. commune粉中占 13% [ 14 ]，在P. sajor-caju粉中占 22% [ 5 ]，在P. sajor-caju单细胞蛋白中占 22% [ 28 ]。蘑菇中的高谷氨酸含量解释了蘑菇产生的独特的味精 (MSG) 样味道。S. commune的主要 EAA是亮氨酸 [14 ]。目前的研究表明，谷氨酸在蘑菇提取物中积累了7％至46％的总氨基酸组成，其中在水提取物中获得的最高，但苏氨酸和亮氨酸在总EAA组成中贡献了最高的EAA。另一方面，在P. sajor-caju乙醇提取物中，赖氨酸被确定为主要成分，而且在同一物种的新鲜蘑菇中也检测到了 [ 28 ]。在分析中使用新鲜蘑菇时，大多数P. sajor-caju富含亮氨酸和苏氨酸作为必需氨基酸 [ 5]。蘑菇中氨基酸的比例与该特定物种中所含蛋白质的量有关。本研究中的总氨基酸在S. commune和P. sajor-caju的测定范围分别为 308.65 mg/g 至 443.84 mg/g 和 172.52 mg/g 至 400.76 mg/g，与水提取和溶剂提取无关. 另一方面，在S. commune中获得的总 EAA（51.44 - 88.56 mg/g）比在P. sajor-caju中发现的总 EAA （35.44 至 76.71 mg/g）要高。在本研究中观察到S. commune中总 EAA 的值高于在同一物种的可食用野生蘑菇中获得的 34% [ 14]。干蘑菇品种Pleurotus ostreatus和Agaricus bisporus的总必需氨基酸值分别测定为 39.25 和 44.95 gm/16gm N，但在其他种类的P. pistillaris中确定了总必需氨基酸的 41.4% [ 14 ]。

5. 结论

在两种蘑菇的水提取物中都发现了大量的蛋白质。在相同的蘑菇品种Pleurotus sajor-caju中，蛋白质的含量因提取物的不同而不同。共鉴定出 17 个氨基酸。Schizophyllum commune提取物中所有9种必需氨基酸均被鉴定，而其中仅获得7种EAA是Pleurotus sajor-caju。两种蘑菇的必需氨基酸均以亮氨酸以及苏氨酸和丙氨酸为主。这些氨基酸在人体生长和新陈代谢中发挥着重要作用。很明显，水萃取是有效的，获得了最高8.95%的总含量，其中苏氨酸和亮氨酸对总EAA组成的贡献高于有机溶剂。

致谢

这项研究是在马来西亚政府教育部拨款的帮助下进行的（拨款编号 ERGS 0038-STWN-1/2013）。作者还感谢来自马来西亚沙巴哥打京那巴鲁马来西亚沙巴大学婆罗洲海洋研究所的孵化场和实验室工作人员的支持。

利益冲突

作者声明与本文的发表没有利益冲突。

参考

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