橄榄油加工废水处理膜前后细菌对不同载体材料的初始粘附研究

摘要：为了提高生物反应器的启动速度和效率，有时会使用生物膜技术。该技术使用各种类型的材料来促进微生物的粘附。在这项研究中，评估了惰性基材和经过橄榄油厂废水 (OMWW)调节膜后的基材的表面特性，以了解 OMWW 对粘附的影响以及优化细菌粘附的最合适材料。在用 OMWW 处理之前和之后测试了由不同聚合物制成的三种常见基材的细菌粘附：PP（聚丙烯）、PET（聚对苯二甲酸乙二醇酯）和 PVC（聚氯乙烯）。这通过测量所研究的细菌菌株和载体在用 OMWW 处理前后的接触角来研究表面的物理化学特性。未经处理和处理过的支持物的初始粘附测试结果显示细菌细胞如何粘附到基材上的差异。在用 OMWW 处理之前，PVC 和 PP 显示出显着的粘附能力，是 PET 的两倍 [PVC：1.58 × 10 5 CFU/cm 2，PP：1.48 × 10 5 CFU/cm 2和 PET：0.72 × 10 5 CFU/厘米2 ]。用 OMWW 处理后，初始细菌粘附增加了 10 6（从 10 5 CFU/cm 2 对于未处理的支撑物，处理后的支撑物为 10 11 CFU/cm 2），PET 其次是 PP 表现出最高的粘附能力，分别是 PVC 的 2 倍和 1.7 倍[PET：1.39 × 10 11 CFU/cm 2，PP：1.15 × 10 11 CFU/cm 2和 PVC：0.67 × 10 11 CFU/cm 2 ]。 OMWW调理膜影响塑料载体的理化特性，尤其是供体电子特性，提高细菌对基材的初始粘附力（10 5至10 11 CFU/cm 2）。因此，表面的物理化学特性对于处理前后细菌在载体上的初始粘附很重要。

关键词

.调理 膜,初粘力,橄榄油 废水,理化性质

一、简介

废水处理已成为实现双重目标的必要条件：首先，净化环境中过量的有机物；其次，将处理过的水重新用于灌溉，尤其是在缺水的国家。专门生产橄榄油的地中海地区尤其受到橄榄油厂废水（OMWW）的影响，这对动植物有害。为了减轻 OMWW 的影响，使用了多种技术，包括膜过滤 [ 1 ]、反渗透 [ 2 ]、电化学氧化 [ 3 ]、土地处理 [ 4 ] 以及厌氧消化等生物处理以产生生物甲烷 [ 5 ] 和好氧处理 [ 6] . 甲烷化不仅减少了废水中的有机物，而且将其转化为可再生能源，即甲烷。厌氧消化开始后，沼气检测仅在启动的第二周进行 [ 7 ]，因为需要时间来积累足够量的生物质来处理有机物。产乙酸菌和产甲烷古菌的倍增时间很慢，大约十天左右。通常，当生物反应器中的内容物被更新时，无论是厌氧的还是好氧的，一些生物质会在出口​​的流出物中损失，这会延迟生物过程 [ 8] . 在生物反应器中使用支撑物可以满足几个要求，即一方面，微生物将自身附着在表面上，从而形成稳定的生物膜，增加微生物与环境接触的表面积，另一方面它们限制了微生物的生长。流出物造成的生物质损失和生物反应器在其内容物更新后的启动速度增加。使用几种类型的基材（塑料、沙子、石头、沸石等）来促进生物膜的形成。许多不同的研究得出结论，物理化学特性、粗糙度、pH、离子强度和孔隙率在细菌与基质的初始粘附中起着重要作用 [ 8 ] - [ 14 ]。

微生物对生物载体的粘附很少受到关注的一个方面是调理膜现象：当浸入液体介质中时，营养物质会在材料表面沉积[ 15 ]。糖和蛋白质等有机材料中的物质可以吸附到表面，形成调理膜并影响物理化学特性、粗糙度、表面电荷和润湿性。反过来，调理膜会影响细菌对表面的粘附 [ 15 ]。

据我们所知，没有任何工作强调 OMWW 调节膜或更一般地说，任何有机材料对废水处理生物反应器中的载体的影响。在这项工作中，我们的目标是展示 OMWW 调理膜如何改变生物载体的物理化学特性以及细菌对 OMWW 处理和未处理的基材表面的粘附性。

2。材料和方法

2.1。细菌菌株和细菌悬浮液的制备

用作生物模型的细菌菌株是来自实验室消化器的可选厌氧革兰氏阳性细菌。这种细菌被添加到厌氧消化器中的微生物群中，以增加沼气的数量[ 16 ]。使用的细菌正在申请专利。该菌株在 Luria Bertani 液体培养基 (LBL) 中 37˚C 培养 24 小时。为了去除培养基残留物，然后通过离心（5000 g 15 分钟）收集细菌并用0.1 M 离子强度的 KNO 3溶液洗涤两次。最后，用 KNO 3 (0.1 M)溶液制备细菌悬浮液。该离子溶液用于模拟高强度 OMWW [ 17 ] [ 18 ] 的特性。

2.2. 塑料支架

选择了三种普通塑料载体材料，因为它们成本低、耐用且易于使用，并且它们通常用作厌氧消化器中的移动载体材料：聚对苯二甲酸乙二醇酯 (PET: (C 10 H 8 O 4 ) n )、聚丙烯 (PP: (C 3 H 6 ) n ) 和聚氯乙烯 (PVC: (C 2 H 3 Cl) n )。将每种塑料材料切成 1.5 cm 2的方形试样用于接触角测量实验，并切成 1 cm 2用于附着力测试的方块。将塑料支架浸入乙醇中 15 分钟以消毒并去除其表面的污垢，并在无菌蒸馏水中进行 10 分钟的超声浴。试样用无菌蒸馏水冲洗几次。然后将它们在无菌区域中干燥，然后在无菌条件下储存以备后用。

2.3. 实验附着力

将含有约 10 8 CFU/ml 的 10 ml 细菌悬液在含有 PET、PP、PVC 试样（每个支持物 3 个试样，根据上述方案清洁和消毒）的培养皿中孵育，未经处理并通过无菌 OMWW 处理 3小时在 37°C。孵育后，然后用无菌蒸馏水将试样冲洗 3 次以去除未粘附的细菌。将塑料试样浸入含有无菌生理水（NaCl：9 g/l）的试管中。使用超声浴（超声波）将细菌细胞从惰性载体上分离 5 分钟 [ 19 ]。通过超声方法收集粘附的细菌，并使用细菌悬浮液的连续稀释技术（稀释至 10-3在未处理的支持物的情况下和 10 -9对于用 OMWW 处理的支持物）。实验进行了 3 次。

2.4. 接触角测量

2.4.1。细菌

Busscher 等人已经描述了测量细菌层接触角的方法。[ 20] . 简而言之，使用过滤斜坡将制备的细菌悬浮液沉积在醋酸纤维素过滤器（0.45 μm）上，产生厚度可能代表 50 至 100 个细胞的细菌垫。将该薄膜放置在玻璃支架上并使其蒸发。然后测量接触角。水 (w)、甲酰胺 (f) 和二碘甲烷 (d) 用作参考溶剂。在注射器末端形成一滴液滴，以沉积在样品表面上。使用放置在测角仪（GBX Instruments，France）上的 CCD 相机立即获取（Windrop）一系列数字图像。对每个样品和每种溶剂进行 3 次测量。实验重复 3 次。确定自由表面能：Lifshitz-Van der Waals γ LW，电子受体γ +和电子供体γ -使用 Van Oss 等人的方程。[ 21 ]。

在这种方法中，接触角 (θ) 可以表示为等式 (1)。

γ大号( 1 + cos θ ) = 2 ⋅ (γ长宽小号⋅γ长宽大号--------√+γ+小号⋅γ-大号------√+γ-小号⋅γ+大号------√)(1)

并且可以使用等式（2）估计定量疏水性。

ΔG我我_= - 2 [((γ长宽一世)12-(γ长宽w)12)2+ 2 ((γ+一世γ-一世)12+(γ+wγ-w)12-(γ+一世γ-w)12-(γ+wγ-一世)12) ](2)

2.4.2. 带和不带调节膜的支架

通过比较这些塑料材料经OMWW处理前后的理化特性，研究了OMWW调理膜对支撑物理化特性​​的影响。处理包括将材料在 37˚C 的 OMWW 中浸泡 3 小时，然后在无菌区干燥。

对于未经处理的载体，在清洁、消毒和干燥后测量接触角。对于处理过的载体，接触角是在用 OMWW 处理后测量的。基本原理与细菌相同。使用不同极性和已知表面能的三种探针液体的固着滴技术测量支持物的接触角。OMWW 是从摩洛哥 Beni Mellal 地区的不连续压榨工艺榨油机中收集的。

2.5. 统计分析

使用软件 Excel 分析工具包 2016 版进行统计分析。t 检验：假设等方差的两个样本用于比较每个支持在 OMWW 治疗前后的平均值（P < 0.05）。

3. 结果

3.1。细菌对用 OMWW 处理和未处理的支持物的实验粘附

本节介绍了所选细菌菌株对几种支持物的粘附力的结果，这些支持物的物理化学特性以及它们是否在 OMWW 中进行了调节。与用 OMWW 处理的那些相比，细菌菌株附着在未经处理的支持物上的能力如图 1 所示。

在图 1 (a) 中，粘附测试的结果表明，在未处理的载体材料（PET、PP 和 PVC）中，它们促进初始细菌粘附的能力显着 [t 检验表明 (PET) 与 (PET) 显着不同。 PP, PVC) (P < 0.05) 和 (PP) 与 (PVC) 没有显着差异 (P > 0.05)]。PET是被研究菌株定植最少的基材，而PVC含有最多的粘附细菌，其次是PP；PVC 和 PP 的定植率都是 PET 的 2 倍以上 [PVC：1.58 × 10 5 CFU/cm 2；PP：1.48×10 5 CFU/cm 2；PET：0.72×10 5 CFU/cm 2]。这些未处理基材上的附着力按 PVC > PP > PET 的顺序降低。用 OMWW 处理可将所有支持物上的细菌粘附增加 10 6倍（从未经处理的支持物的 10 5 UFC/cm 2到处理过的支持物的 10 11 UFC/cm 2）

(一)(二)

图 1。附着在支撑上的初始细胞数。(a) 未经处理的支架；(b) 处理过的支持物。误差线代表细菌计数的标准偏差。

（图1（b））。经OMWW处理后，促进细菌粘附的各载体材料在统计学上没有显着差异（P > 0.05）。PVC是被研究菌株定植最少的基材，而PET含有较高的定植率（是PVC的2倍） )，其次是PP（是PVC的1.7倍）[PET：1.39×10 11 CFU/cm 2；PP：1.15×10 11 CFU/cm 2；PVC：0.67 × 10 11 CFU/cm 2 ]。这些处理过的基材上的附着力按 PET > PP > PVC 的顺序降低。

3.2. 细菌的表面能成分

进行细菌的接触角测量，然后用于确定表面能分量（表 1）。

疏水性定性分析表明，细菌表面与水的接触角为θ w = 33.8˚，这意味着被测细菌具有亲水性。定量方法证实了这一结果，发现测试的应变具有正的自由表面能（Δ G iwi = 31.1 mj/m 2）。此外，该菌株具有很强的电子供体特性（γ - = 50.62 mj/m 2），而电子受体特性非常低（γ + = 0.59 mj/m 2）。Nguyen 等人也发现了类似的结果。曾研究Methanosarcina barkeri菌株 [18 ]。鉴于这些结果，Latrache 等人。已经表明，通过接触角测量的疏水性与高 N/C 比直接相关，与 O/C 比负相关[ 22 ]。

3.3. 塑料支架的理化特性

在用 OMWW 处理载体之前和之后测量不同塑料载体的接触角，然后用于确定表面能分量（表 2）。

在用 OMWW 处理之前，所有支持物都是强疏水性的（θ w (PET) = 80.9˚；θ w (PP) = 77.8˚；θ w (PVC) = 76.3˚）（图 2 (a)）。基于 Van Oss 方法 [ 21 ] [ 23 ]，三种载体的定量疏水性 (∆G iwi ) 与定性方法 (θ w ) 一样，具有疏水性 (∆ G iwi (PET) = -52.2 mJ /m 2 ; Δ G iwi (PP) = -46.3 mJ/m 2 ; Δ Giwi (PVC) = -43.1 mJ/m 2 ) (图 2(b))。三种未处理载体的电子供体 γ -特征值约为 5 mJ/m 2 ( γ - (PET) = 4.9 mJ/m 2 ; γ - (PP) = 4.1 mJ/m 2 ; γ - (PVC) = 5.3 mJ/m 2 ) (图 2 (c)) 和电子受体特性的价值

表面

接触角 (˚)

表面能 (mJ/m2)

θd_

θf_

θw

γLW

γ+

γ-

γAB

ΔGiwi

细菌

43.5

38.6

33.8

37.5

0.59

50.62

10.93

31.1

标准。开发。

1.5

2

1.4

0.8

0.1

4.5

表 1。细菌的接触角和表面能分量。

d = 二碘甲烷，f = 甲酰胺和 w = 水，Lifshitz-Van der Waals 的γ LW表面能， γ +电子受体，γ - 电子供体，γ AB Lewis 酸碱表面张力和ΔG iwi：自由能当浸入水中时，该材料的两个实体之间的相互作用。标准。开发。= 标准偏差。

图 2。未处理 (U) 和用 OMWW 处理 (T) 的载体（PET、PP 和 PVC）的物理化学特性。(a) 定性疏水性；(b) 定量疏水性；(c) 电子供体特性；(d) 电子受体特性；U 未经处理；T 用 OMWW 处理。误差线代表标准偏差。

表面

接触角 (˚)

表面能 (mJ/m2)

θd_

θf_

θw

γLW

γ+

γ-

γAB

ΔGiwi

PETU

36.8

57.3

80.9

41.2

0

4.9

0,00

−63.2

标准。开发。

1.5

0.3

3

0.7

0

1.2

PET_

24.4

36.3

70

46.4

1

5.7

4.77

−52.2

标准。开发。

1.6

1.1

1.4

0.8

0.1

1.8

聚丙烯_

57.6

50.1

77.8

30

2.7

4.1

6.65

−42.3

标准。开发。

3

1.4

5.5

1.6

0.1

1.7

聚丙烯_

28.9

41.7

69.5

44.7

0.6

7.9

4.35

−46.3

标准。开发。

1.8

1.7

0.8

0.8

0

1

聚氯乙烯_

44.5

49.8

76.3

37.3

1

5.3

4.6

−48.5

标准。开发。

9

1.6

3.1

3.1

1.1

1.6

聚氯乙烯_

31.5

57.7

75.4

43.6

0,1

10

2,00

−43.1

标准。开发。

0.9

1.3

1.4

1.4

0

1.7

表 2。用 OMWW 处理和未处理的基材组件的接触角和表面能。

U = 未处理的支撑，T = 用 OMWW 和标准处理的支撑。开发。= 标准偏差。

非常微弱 ( γ + (PET) = 0 mJ/m 2 ; γ + (PP) = 2.7 mJ/m 2 ; γ + (PVC) = 1 mJ/m 2 ) (图 2 (d))。

处理后，支撑面保持其疏水性，其疏水性变化不大θ w ( θ w (PET) = 70˚; θ w (PP) = 69.5˚, θ w (PVC) = 75.4˚) (图2 (a)) 和定量疏水性 Δ G iwi (Δ G iwi (PET) = -63.2 mj/m 2 ; Δ G iwi (PP) = -42.3 mj/m 2 ; Δ G iwi (PVC) = -48.5 mj /m 2 ) (图 2 (b))。处理增加了电子供体γ的价值−性状 ( γ − (PET) = 5.7 mJ/m 2 ; γ − (PP) = 7.9 mJ/m 2 ; γ − (PVC) = 10 mJ/m 2 ) (图 2 (c)), 而 valor电子受体特性仍然非常微弱（γ +（PET）=1 mJ/m 2；γ +（PP）=0.6 mJ/m 2；γ +（PVC）=0.1 mJ/m 2）（图2（d） ）。

4。讨论

在这项研究中，菌株对聚对苯二甲酸乙二醇酯 (PET)、聚丙烯 (PP) 和聚氯乙烯 (PVC) 进行了粘附试验。在用 OMWW 处理的支持物和未处理的支持物之间观察到不同的结果。在我们的案例中，未经处理的支持物显示出细菌粘附的差异（PP 和 PVC 的粘附细菌是 PET 的两倍）。这意味着支持物的材料性质可能在微生物粘附中起作用，一些作者提到了这一点 [ 18 ] [ 24] . 用 OMWW 处理的支持物在这种细菌的粘附性方面没有显示出显着差异。这表明底物的性质不影响细菌粘附。另一方面，用 OMWW 处理支持物确实会影响细菌粘附率（从 10 5 UFC/cm 2到 10 11 CFU/cm 2）。与任何惰性胶体颗粒一样，微生物对表面的粘附在很大程度上受物理化学相互作用的控制。这些相互作用的总和——包括静电、Lifshitz-Van der Waals 和酸-刘易斯碱相互作用——可以是吸引的或排斥的。这些相互作用取决于微生物表面、基质表面和悬浮介质特性的物理化学性质。这些物理化学性质包括疏水性、静电荷和电子供体/电子受体特性。因此，所有可能改变参与粘附现象的元素之一的物理化学表面性质的因素都可能有利于或限制微生物的固定[ 25 ]。

此外，基础化学指出，一种亲水实体自然会吸引另一种亲水实体 [ 26 ]，反之亦然。以前的研究人员 [ 26 ] [ 27 ] [ 28 ] 报告说，疏水性不能系统地解释微生物粘附到载体上的结果，酸碱相互作用在粘附现象中起着非常重要的作用 [ 11 ] [ 29 ] [ 30 ]] . 根据这些断言，研究的细菌在 OMWW 处理过的载体表面上的粘附可能部分是由于强载体的给电子特性和弱细菌的电子接受特性之间的酸碱相互作用，这可能还用 OMWW 解释了这种细菌在处理过的支持物上的粘附力。

这里使用疏水性和电子受体/供体特性来解释这些结果。没有考虑静电力，因为测试是在具有高离子强度的液体中进行的 [ 31 ] [ 32 ]。众所周知，细菌在液体培养基中通常带负电荷 [ 33 ]，而 OMWW 具有复杂的结构并含有大量矿物质 [ 34 ]。为了避免细菌细胞和 OMWW 之间的电荷干扰，我们使用了高离子强度的细胞悬浮液。

用 OMWW 处理确实改变了三种载体的自然特性，ΔG iwi和 θ w值发生了显着变化（图 2（a）和图 2（b）），PET 和 PVC 的ΔG iwi略有下降OMWW 处理后的支撑，PP 支撑略有增加（图 2（b））。支持疏水性 θ w尽管 OMWW 含有脂肪，但在用 OMWW 治疗后下降。这可能是由于脂肪酸的亲水部分暴露在外面而疏水部分被吸附在载体表面上，也可能是由于 OMWW 的所有成分（含有糖、蛋白质）的鸡尾酒效应和吸附在支撑表面上的脂肪。几位作者已经表明，通过接触角测量的疏水性与 N/C 浓度的高比率直接相关，与 O/C 浓度的比率负相关 [ 22 ] [ 35 ] [ 36 ] [ 37 ] [ 38] ，这些结果表明，通过接触角测量的疏水性起源是含氮基团，亲水性起源是含氧基团。PET的电子供体特征值略有增加（ γ-ü= 4.9至 γ-吨= 5.7) 在 OMWW 处理后加倍为 PP ( γ-ü= 4.1至 γ-吨= 7.9) 和聚氯乙烯 ( γ-ü= 5.3至 γ-吨= 10) (图 2 (c))。

接触角法在用 OMWW 处理之前和之后的三种载体（PET、PP、PVC）的疏水性和电子供体/受体特性方面给出了非常详细的结果（图 2）。从定性和定量的角度来看，我们发现所有未经处理的聚合物材料都具有明显的疏水特性。此外，所有这些材料都具有低电子供体/受体特性。许多不同的研究表明，这些未经处理的聚合物的表面物理化学特性具有相同的趋势 [ 18 ] [ 24 ] [ 25 ] [ 39 ] [ 40 ] [ 41] . 各种研究表明，调理膜可以由几种有机物质形成，例如蛋白质、多糖、脂质、核酸和胞外多糖 [ 42 ] [ 43 ]。调理成膜是一个多步骤的现象；例如，在海洋环境中的不锈钢上，蛋白质首先被吸附，然后是碳水化合物 [ 44 ] [ 45 ] [ 46 ]。

OMWW 的体质非常复杂，具有不同的性质和浓度。它含有大量的碳水化合物、氮化合物、脂肪酸和矿物质，pH 值在 4 到 6 之间 [ 47 ]。正如不同研究中提到的，多糖可以具有疏水或亲水特性，具体取决于溶液中的自由状态以及它们的三维构象，这会影响用 OMWW [ 40 ] [ 48 ] 处理的支持物的物理化学参数。哈马迪等人。已经表明，不锈钢表面的物理化学参数，包括疏水性和电子受体/供体特性，可以在牛奶调理后被脂肪酸和蛋白质改性 [ 19] .

在我们的例子中，三种载体的物理化学特性（疏水性和电子供体/受体特性）的改变是由于 OMWW 特性（碳水化合物、蛋白质和脂肪含量）。吸附在材料表面的分子的浓度和类型取决于该材料的性质（ΔG iwi、疏水性、电子供体/受体特性、静电荷等）[ 49 ] [ 50 ]。这可以解释我们在未处理和处理过的支持物之间发现的关于疏水性和电子供体/受体特性的差异。

疏水性降低得越多，未经处理的支持物的细菌粘附增加得越多。我们的结果与 Pringle 和 Fletcher [ 51 ] 的工作一致，他们发现与水的接触角（从 0° 到 110°）与不同细菌在四个不同表面上的粘附之间存在关系。此外，Absolom 等人。[ 52 ] 显示了不同种类聚合物（从 58° 到 110°）与水的接触角与细菌粘附之间的线性关系。细菌在未经处理的基材表面上的粘附与电子供体特性无关（R 2 = 0.007）。相反，处理过的表面上的实验附着力与电子供体特性（R 2= 0.93)。支持物的电子供体特性越大，细菌粘附减少的越多。

5。结论

该细菌在质量和数量上都具有非常显着的亲水特性和强的供体电子特性。

未经处理的 OMWW 支持物具有疏水特性和非常弱的电子受体/供体特性。

处理后，与未处理的支持物相比，支持物保留了它们的疏水特性，几乎没有变化。对于 PP 和 PVC，处理过的基材的电子供体特性加倍。

细菌对未经处理的支持物的粘附受疏水性的影响。事实上，疏水性降低得越多，细菌粘附增加得越多，对于未经处理的支持物，PVC 和 PP 的细胞粘附量是 PET 的两倍。用OMWW处理后，载体的电子供体特性越大，细菌粘附越减少；对于处理过的支持物，PET 的细胞粘附量是 PVS 的两倍，PP 是 PVC 的 1.7 倍。OMWW 的调理膜显着增强了所有三种载体的细菌粘附（从 10 5 UFC/cm 2到 10 11 CFU/cm 2）。

总之，支持材料的选择会影响细菌粘附，尤其是在考虑到 OMWW 调理膜后，它会促进高水平的细菌粘附。

利益冲突

作者声明与本文的发表没有利益冲突。

参考

[ 1 ] Zagklis, DP, Vavouraki, AI, Kornaros, ME 和 Paraskeva, CA (2015) 通过膜过滤和树脂吸附/解吸净化橄榄磨废水酚。危险材料杂志，285, 69-76。

[ 2 ] Ochando-Pulido, JM, Rodriguez-Vives, S., Hodaifa, G. 和 Martinez-Ferez, A. (2012) 操作条件对预处理橄榄磨废水反渗透性能的影响。水研究，46，4621-4632。

[ 3 ] Gotsi, M., Kalogerakis, N., Psillakis, E., Samaras, P. 和 Mantzavinos, D. (2005) 橄榄油厂废水的电化学氧化。水研究，39，4177-4187。

[ 4 ] Cabrera, F.、López, R.、Martinez-Bordiú, A.、De Dupuy Lome, E. 和 Murillo, JM (1996) 橄榄油厂废水的土地处理。国际生物降解和生物降解，38, 215-225。

[ 5 ] Rincón, B.、Borja, R.、Martín, MA 和 Martín, A. (2009) 对来自先前水解-产酸步骤的酸化橄榄磨固体残渣的两阶段厌氧消化过程的产甲烷步骤的评估。废物管理，29, 2566-2573。

[ 6 ] Olivieri, G.、Marzocchella, A.、Salatino, P.、Giardina, P.、Cennamo, G. 和 Sannia, G. (2006) 用平菇进行橄榄磨坊废水修复。生化工程杂志，31，180-187。

[ 7 ] Weiland, P. (2010) 沼气生产：现状和前景。应用微生物学和生物技术，85, 849-860。

[ 8 ] Munoz Sierra, JD, Oosterkamp, MJ, Wang, W., Spanjers, H. 和 van Lier, JB (2019) 上流式厌氧污泥毯式反应器和厌氧膜生物反应器处理酚类废水的比较性能：克服高盐度。化学工程杂志，366、480-490。

[ 9 ] Mao, Y., Quan, X., Zhao, H., Zhang, Y., Chen, S., Liu, T. 和 Quan, W. (2017) 使用新型亲电悬浮生物膜载体加速移动床生物膜工艺的启动. 化学工程杂志，315, 364-372。

[ 10 ] da Silva, AN, Macêdo, WV, Sakamoto, IK, Pereyra, D. de LAD, Mendes, CO, Maintinguer, SI, Caffaro Filho, RA, Damianovic, MHZ, Varesche, MBA 和 de Amorim, ELC (2019) 生物氢生产从厌氧流化床反应器中的乳业废水中提取。生物质和生物能源，120, 257-264。

[ 11 ] Hamadi, F.、Latrache, H.、Mabrrouki, M.、Elghmari, A.、Outzourhit, A.、Ellouali, M. 和 Chtaini, A. (2005) pH 值对金黄色葡萄球菌在玻璃上的分布和粘附的影响。粘附科学与技术杂志，19，73-85。

[ 12 ] Tang, B., Yu, C., Bin, L., Zhao, Y., Feng, X., Huang, S., Fu, F., Ding, J., Chen, C., Li, P. and Chen, Q. (2016) 一体化移动床生物膜反应器-膜生物反应器的基本要素：生物膜的粘附特性和微生物群落。生物资源技术，211, 574-583。