医学检验毕业课题设计报告范文

课 题 题 目

儿童感染性疾病中CRP检测的应用

课题的目的，国内外研究现状和发展趋势（附主要参考文献）：

课题的目的：

探讨儿童感染性疾病中C反应蛋白（CRP）检测的临床意义，既有助于感染病原的筛查，达到早查早治的目的，也有助于治疗效果的评价。

国内外研究现状和发展趋势：

从上世纪抗生素出现后，有些人认为感染性疾病不再是儿童主要的疾病，而事实并非如此。国家卫生部免疫规划委员会指出：由于新的感染疾病不断发生，肿瘤等都与感染有关，所以它仍然是儿童的最大 “杀手”。小儿感染性疾病的主要病因是细菌、病毒或其他致病微生物感染引致，特别6-9月是小儿细菌、病毒感染性疾病的高发期，此其间正值夏季，气温高，病毒、细菌繁殖快，小儿到户外活动的频率高、进食的食物种类明显增多，因此特别容易感染细菌、病毒而导致发病。如果小儿反复感染疾病，会引起食欲不振、胃肠功能紊乱，时间长了，会出现铁、锌等微量元素的缺乏，导致营养性缺铁性贫血、锌缺乏等疾病发生，因此而降低免疫力，影响儿童的生长发育。

细菌感染人体，人体为了保护自身而产生炎症机制，临床表现为发热，病理表现为白细胞增多，CRP增加[1]。CRP是一种非特异性急性期炎症反应物[2]，是由肝细胞产生[3]，99%的正常健康人血清浓度低于1.0mg/dl[4]，组织坏死性炎症，是细菌感染和严重组织损伤的一项诊断指标[5]，特别是细菌感染后24小时内可上升1000倍。早在80多年前，有两位外国学者发现，一些感染了细菌的病人体内会出现一种变化，即细菌的细胞壁上的C多糖体与病人血清中蛋白质发生肉眼可见的沉淀反应[6]。人体血清中这种蛋白质现被称为CRP[7]。后来经研究证实，CRP聚集在细胞损伤部位[8]，选择性沉积于坏死细胞暴露的损伤的膜磷脂上[9]；它与裂解细胞释放的游离DNA结合成复合物[10]。尽管尚不明确其主要的特异作用，但已发现CRP对免疫细胞有多种影响[11]，并可激活补体[12]。基于上述机制，在临床上，CRP检测主要可归纳为以下两种意义：首先，CRP的检测可以帮助辨别体内是否有炎症[13]。CRP可在各种急性炎症、组织损伤、手术创伤、放射性损伤等发作后数小时内迅速升高，并有成倍增长之势[14]。病变好转时，又迅速降至正常，其升高幅度与感染的程度呈正相关。因此，CRP被认为是人体急性炎症时反应最主要、最敏感的标志物之一[15]。CRP与其他炎症因子如白细胞总数、红细胞沉降率和多形核白细胞等具有相关性，尤其与白细胞总数存在正相关。据报道，对未住院的非特异呼吸道疾病，无明显感染灶的发热和患急性中耳炎的婴儿，CRP增高（≥2mg/dl或滴度≥1:150）对诊断细菌感染比血沉≥30mm/hl要更特异一些。可以说，同时结合CRP值和临床表现，对诊断急性炎症的价值超过血沉和白细胞计数，且CRP可以反映炎症的程度和时间。如果白细胞计数和CRP均在正常范围，则急性炎症的可能性很小。

其次，它可以帮助辨别感染类型。CRP可用于细菌和病毒感染的鉴别诊断[16]：细菌感染时，CRP水平升高；而病毒感染时，CRP不升高或轻度升高，尤其CRP极度升高（超过8.0mg/dl）对细菌性感染更有诊断价值，一项关于154例发热儿童的研究表明，CRP值为2-4mg/dl时，既有细菌又有病毒感染，但CRP大于4mg/dl时，79%为细菌感染，特异性为90%。中耳炎患者CRP>2.0mg/dl时，22%为细菌，6%为非细菌原因。一项关于72例由败血症（73例次）或念珠菌菌血症（3次）的免疫受损病人（主要为白血病）的研究表明，CRP≥2.0mg/dl的占94%；有明显全身病毒感染（主要为脑膜脑炎和肺炎）的72例中77%CRP小于2.0mg/dl。85例次癌症发热患儿中性细胞减少时，细菌感染者CRP≥4.0mg/dl（平均17mg/dl）明显不同于病毒感染或无感染者（平均3mg/dl），敏感性为95%，特异性77%。可见，CRP值可以帮助医生辨别感染的病原微生物类型，有针对性地给予药物和治疗。而且CRP能很快降解（半衰期短于24小时），因此测定血中CRP可以提供治疗是否充分的信息。

总之，近年来的研究显示，CRP直接参与了急性炎症疾病的发生发展，并且是感染性疾病并发症最强有力的预示因子与危险因子。美国的一项调查结果表明，那些有高水平炎症反应的女性(CRP高于3mg/L)，死于心肌梗塞和卒中的危险性，比高胆固醇血症者还高两倍。而且CRP高的人即使胆固醇水平不高，所面临的中风和心脏事件的风险也相当高。因此，有专家建议，定期进行CRP的检查，可以及早发现心脏疾病的潜在危险。而本组研究欲证实，对于儿童感染性疾病来说，CRP检测也同样重要，既有助于感染病原的筛查，也有助于治疗效果的评价，故在儿童感染性疾病的临床诊治中，有必要将CRP检测进一步推广应用。

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研究内容、实验设计方案、预期结果：

研究内容：

将2010年2月-2011年2月我院收治的102例急性感染患儿设为观察组，其中49例为细菌感染、53例为病毒感染，将同期进行体检的55例正常患儿设为对照组，比较分析各组CRP水平及观察组治疗前后CRP水平。

实验设计方案

1. 资料与方法

1.1 一般资料

将2010年2月-2011年我院收治的102例急性感染患儿设为观察组，其中49例为细菌感染、53例为病毒感染，将同期进行体检的55例正常患儿设为对照组。细菌感染患儿：包括男28例、女21例；年龄为5-9岁，平均年龄为6.1±2.5岁；病毒感染患儿：包括男29例、女24例；年龄为3-8岁，平均年龄为5.9±1.8岁；正常患儿：包括男31例、女24例；年龄为4-9岁，平均年龄为6.2±2.8岁。三组患儿在性别、年龄等方面无统计学差异，具有可比性（P>0.05）。

1.2 方法

1.2.1 试剂与器材

辣根过氧化物酶（HRP）；抗体（IgG）；0.1mol/L过碘酸钠、乙二醇、4mg/L硼氢化钠、1.0mol/L pH9:5碳酸盐缓冲液、0.01mol/L pH7.2PBS、Sephadex G-25、Sephadex G-200、0.001mol/L pH4.2醋酸盐缓冲液；磁力搅拌器、层析柱、紫外分光光度计等。

1.2.2 实验原理

取2-3ml清晨空腹血，待血块收缩后（2h内）分离血清，采取酶联免疫吸附试验双抗体夹心法测定血清CRP水平。其原理为：先将已知抗原或抗体包被于固相载体的表面，与待检样品中相应抗体或抗原发生反应，再加入酶标记抗体或抗原与免疫复合物结合，最后加入酶的作用底物，根据产物颜色的深浅或测定其A值，可进行定性或定量分析。

1.2.3 操作方法

HRP8.0mg溶于蒸馏水2.0中。加0.1mol/L过碘酸钠0.8ml，22℃轻搅20min。加乙二醇6滴，继续搅拌5min。过Sephadex G-25，用0.001mol/L pH4.2醋酸盐缓冲液平衡，洗脱，分别收集后合并棕色部分，浓缩为2.0ml。在上述溶液中加抗体14.0mg。逐滴加入1.0mol/L pH9.5碳酸盐缓冲液，使pH升至9.0-9.5，室温轻搅2h。加4mg/L硼氢化钠0.2ml，置4℃2h。在0.01mol/L pH7.2 PBS中4℃透析平衡。反应混合物过Sephadex G-200纯化，柱用0.01mol/L pH7.2 PBS平衡和洗脱，流速为15ml/h，分部收集，每管3ml，测定各管的A403nm和A280nm值。将洗脱图形中第一峰合并，分装后贮存于4℃，备用。

1.2.4 结果判断

根据下列公式计算试验结果。酶结合物中HRP浓度（mg/ml）=酶结合物A403nm×0.4；酶结合物中抗体（IgG）量（mg/ml）=（A280nm-A103nm×0.3）×0.62；酶/抗体摩尔比=HRP浓度×4/IgG浓度；该比值在1-2之间者为宜。

1.3 统计学分析

数据采用SPSS统计软件对数据进行分析。两组间比较采用配对资料的t检验；率的比较采用χ2检验。设P<0.05为差异有统计学意义。

预期结果：

1）细菌感染患儿CRP水平显著高于病毒感染患儿及对照组患儿；2）细菌感染患儿CRP水平治疗后较治疗前显著降低，从而进一步验证CRP水平对细菌感染患儿治疗效果评估的应用价值。

所需条件和完成时间：

指导教师意见：

指导教师签名

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教研室意见：

教研室主任签名

年 月 日

学院意见：

学院负责人签名

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