孟加拉国吉大港红牛、BCB1和Munshiganj公牛精液质量和繁殖力比较研究

本研究旨在分析吉大港红牛 (RCC)、BLRI 牛品种 1 (BCB1) 和孟加拉国 Munshiganj 牛的本地公牛的新鲜和解冻后精液质量和繁殖力。通过人工阴道装置收集了 172 份精液，并使用孟加拉国家畜研究所的计算机辅助精子分析仪 (CASA) 进行了精液分析。商业稀释剂 (AndroMed) 用于稀释新鲜精液。平衡后（4°C 4 小时），使用可编程生物冷冻机进行冷冻。对解冻后的精液进行精子活力和运动学评估。冷冻保存的精液吸管用于人工授精 (AI)，并根据 60 天不归还率确定公牛的生育能力。精子的活力在基因型之间存在显着差异（p < 0.01）。Munshiganj 公牛的总运动性较高，而 BCB1 公牛的静态运动性较高。然而，公牛的精液量和精子浓度没有显着差异（p > 0.05），但在 Munshiganj 公牛中发现最高浓度（1669.60 ± 19207 万/ml），其次是 RCC（1648.70 ± 9107 万/ml）和 BCB1公牛（1481.60 ± 1.6735 亿/毫升）。此外，在 BCB1 中观察到最高的弯曲尾巴 (5.89 ± 0.75%)、卷曲尾巴 (1.01% ± 0.22%) 和远端中段反射 (2.26% ± 0.28%)，其次是 Munshiganj 和 RCC。解冻后的侧向头部位移 (ALH) 幅度高于新鲜精液。无论基因型如何，解冻后精液的运动学参数均低于新鲜精液。Munshiganj 公牛 (394.34 ± 127.95) 可以产生更多剂量/射精，然后是 RCC (349. 01 ± 120.91) 和 BCB 1 多头 (331 ± 98.99)。公牛的生育率没有差异 (p > 0.05)，但发现 RCC (62.06% ± 1.94%) 公牛的最高值。因此，可以简明扼要地说，吉大港红牛精液质量优于BCB 1和蒙市岗公牛。

关键词

本地公牛, CASA ,精子运动学,形态学和生育力

一、简介

与现有的其他外来品种及其杂交品种相比，孟加拉本土牛的生产性能较低，但它们很好地适应了热带环境，可以在使用劣质饲料时保持身体状况，并且对当地疾病有很好的抵抗力[ 1 ]。与其他本土基因型相比，在孟加拉国的吉大港区发现的吉大港红牛具有独特的身份，具有迷人的红色体色、美味的牛奶和肉类，这使其成为该地区的首选 [ 2]。Munshiganj 型，多为奶油色至暗粉色，体型为牛奶型，在其栖息地周边地区作为挤奶牛的需求量很大。孟加拉国家畜研究所 (BLRI) 通过选育具有较高产奶潜力的当地 Pabna 牛，开发了 BLRI Cattle Breed-1 (BCB1)。由于生产力低于外来品种及其杂交，由于与外来品种不分青红皂白地杂交，本地牛种群将日益减少。虽然，与杂交相比，终生生产力很高，但农民却忽略了这一点，以从杂交中获得更高的产量。考虑到上述事实，孟加拉国家畜研究所正在努力保护和随后发展本地物种，如牛、水牛、过去几十年的绵羊和山羊。为了随后改进本地种群，使用优质公牛的优质精液进行适当的育种计划是先决条件。因此，精液分析和公牛繁殖力对于育种规划和选择合适的种公牛同样重要。精子作为异质群体存在于射精中，这就是为什么精子活力是一个重要且关键的参数，它表明精子在女性生殖道中移动以到达卵母细胞并开始受精时的渐进运动 [3 ] [ 4 ]。精子活力的评估提供了有关哺乳动物精子精子中段 [ 6 ] 内的能量状态 [ 5 ] 和线粒体活性的重要信息。在 1980 年代之前，精子的活力是手动测量的 [ 7 ] [ 8 ]，但发现结果的差异如此之大。因此，为了解决这个问题，开发了计算机辅助精子分析 (CASA) 技术来提高精液分析的准确度和精密度 [ 9 ] [ 10 ]]。CASA 系统基于数千个精子轨迹的值提供信息，允许进行个体运动分析和准确评估重要的动力学参数，并被认为是世界范围内精液分析的强大工具 [ 11 ] [ 12 ]。精子运动学包括在采集期间测量给定精子的每个头部点之间的距离 [ 13 ]。运动学参数（VSL、VAP、VCL、LIN、ALH、STR 和 BCF）通常用于估计公牛的生育潜力 [ 14 ]。如今，精液活力和动力学参数的评估是家畜精子质量评估的重要组成部分 [ 15]。精子的运动性和形态被认为是公牛生育状况的基准，用于在农场接受或拒绝用于人工授精 (AI) 的精液 [ 16 ] [ 17 ] [ 18 ] [ 19 ]。液滴可以被识别为精子质膜下的规则形状的细胞质残余物，这对体内[ 20 ] 和体外[ 21 ] 的精子质量都有负面影响]。然而，关于 CASA 在孟加拉国本地公牛精液分析中的使用和应用的信息非常少，这就是为什么进行这项研究以将 RCC、BCB1 和 Munshiganj 公牛的精液质量与其生育能力以及建立本地牛种质资源的精液库，用于牛的保护和发展。

2。材料和方法

2.1。公牛选择、管理和精液采集

本实验选用吉大港红牛育种公牛、BLRI Cattle Breed 1和Munshiganj作为遗传材料。RCC 和 Munshiganj 公牛的年龄为 3 - 5 岁，BCB1 公牛的年龄为 4 - 8 岁。将公牛单独圈养在密集的舍内，喂食绿色饲料（纳皮尔、德国和玉米）、浓缩物和由自由饮水支持的矿物质混合物。定期进行驱虫和疫苗接种。在达卡萨瓦尔的孟加拉国家畜研究所的牛研究农场，使用人工阴道 (AV) 装置 [ 22 ] 在清晨 6 点到 6 点 30 分每周收集两次精液。收集的精液立即转移到 37°C - 38°C 的水浴中并测量体积。

2.2. 运动性、运动学参数和形态评估

来自三种基因型（BLRI 牛品种 1-33 精液、红色吉大港牛 104 精液和 Munshiganj 牛 35 精液）的一百七十二 (172) 份精液用于精液分析。使用计算机辅助精子分析仪 (CASA) (Hamilton Throne, IVOS II) [ 23 ] 测量运动、形态、浓度和运动学参数。记录精子活力的 CASA 软件设置为：帧速率 60 Hz，获取的帧数 30，最小对比度 35，最小细胞大小，5 像素，细胞大小，9 像素，细胞强度 110 像素，路径速度 (VAP) 50 μm/s，直线度 (STR) 70%，VAP 切割-off、30 μm/s 和 VSL 截止 15 μm/s。在预热 (38˚C) Leja ®4 腔载玻片（深度 20 μm），加载 1 μl 制备的精液样本并分析精子活力特征。对于每个样品，在腔室中央网周围至少有五个光场用于计数精子。除了精液样品的运动性 (%) 和浓度 (×10 6 mL - 1 ) 之外，还评估了以下运动学参数（表 1）和（图 1）。在精液分析过程中，标准温度小心地保持在 37˚C - 38˚C。

2.3. 稀释、平衡和冷冻

商业稀释剂（AndroMed ®，Minitube，德国）用于稀释新鲜精液，其中根据制造商的指南添加 80% Mili-Q 水和 20% AndroMed ®粉末，使最终浓度为 80 × 10 6精子/ml。用稀释剂稀释精液，使精子浓度达到 2000 万/剂。将稀释的精液放入冷藏柜（Minitube，德国）在 4°C 下保持 4 小时以达到平衡。精液样本是

参数

参数说明

单元

动力

基于速度和进展的不同运动组的精子百分比

%

专注

每毫升精子数

×106毫升-1

VAP

基于每 11帧 VCL 路径的平均路径速度

微米-1

对战我

从起点到终点沿最短路径的直线速度

微米-1

VCL

沿实际游泳路径的曲线速度

微米-1

ALH

横向头部位移幅度

微米-1

BCF

基于每秒 VCL 交叉 VAP 的节拍交叉频率

赫兹

STR

直线度，以 VSL/VAP 表示

%

林

曲线路径的线性度，表示为 VSL/VCL

%

表 1。由 CASA 系统测量的精子运动学参数 [ 15 ] [ 24 ] [ 25 ]。

图 1。精子速度参数（VCL、VAP、VSL 和 ALH）[ 26 ]。

使用自动填充、密封和印刷机（MPP Uno，Minitube，Germany）在标准印刷吸管（0.25 ml）中填充和密封。平衡后，使用可编程生物冷冻机（Turbo Freezer M，Minitube，Germany）在液氮（LN 2 ）蒸汽中进行冷冻（15分钟）。然后将吸管放入 LN 2 (-196˚C) 中过夜储存。

2.4. 解冻后评估和人工授精 (AI)

储存 24 小时后，在 37°C 下解冻精液吸管 30 秒。使用与先前描述的新鲜精液相同的方案评估解冻后的精液的精子活力和运动学。对于每个样品，在腔室中央网周围至少有五个光场用于计数精子。冷冻保存的精液吸管用于农场和站内自然发情奶牛的人工授精（AI）。最后，公牛的生育力是根据各种公牛的精液授精的奶牛总数和60天内未恢复发情的授精奶牛总数中受孕的奶牛数来确定的。

2.5. 统计分析

所有数据均记录在 Excel 数据表中，并使用 SPSS (16.0) 进行单因素方差分析，然后进行 DMRT'S，以评估三种基因型的新鲜和冷冻精液的平均运动特征及其精子形态、运动学、生育力和剂量之间的差异/射精。P 值（p < 0.05）被认为具有统计学意义。

3. 结果

3.1。体积和浓度

评估和量化来自 RCC、Munshiganj 和 BCB1 公牛的新鲜射精精液。基因型之间的平均体积和浓度没有显着差异，尽管 Munshiganj 公牛 (4.93 ± 0.15) 产生的精液量较高，其次是 BCB1 (4.45 ± 0.24) 和 RCC 公牛 (4.10 ± 0.11)。在 Munshiganj 公牛 (1669.60 ± 19207 万/ml) 中发现最高精子浓度，其次是 RCC (1648.70 ± 9107 万/ml) 和 BCB1 公牛 (1481.60 ± 16735 万/ml) (图 2 )。

3.2. 新鲜和冷冻精子活力

除新鲜精液进行性运动外，公牛的总运动和静态运动差异显着（p < 0.01）。在 RCC 公牛的新鲜和解冻后的精液中观察到最高的总、进行性和最低的静态运动，其次是 Munshiganj 和 BCB1。解冻后精液的总运动和渐进运动的平均值低于公牛的新鲜样品，但与静态运动相比，解冻后精液的平均值高于新鲜精液样品（表 2）。

3.3. 精子形态

卷尾、DMR 和远端液滴的平均值显着不同 (p < 0.01)，而弯曲尾和近端液滴在三种天然基因型中没有显着差异 (p < 0.05)。在 RCC 中发现远端液滴的最高值和卷尾的最低值，其次是 Munshiganj 和 BCB 1 公牛精液（表 3）。

3.4. 精子运动学

新鲜和解冻后精液的运动学参数没有显着差异，但解冻后精液的跳动交叉频率在公牛之间存在差异（p <0.05）。解冻后记录的 ALH 值高于新鲜精液。然而，解冻后精液的其他运动学参数值比公牛新鲜精液的值降低（表 4）。

NS = 无意义。

图 2。RCC、BCB1 和 Munshiganj 公牛的精子浓度（平均值 ± SD）。

参数/公牛

红吉大港牛

BLRI 牛品种 1

蒙希甘杰

牛

签名。等级

总动力 (%)

新鲜的

78.31 ± 1.26一个

70.56 ± 3.21b

79.19 ± 2.02一个

**

解冻后

61.88 ± 1.11一个

50.48 ± 3.16b

67.98 ± 7.08一个

**

渐进运动 (%)

新鲜的

57.35±15.14

53.02 ± 19.58

55.80 ± 19.44

NS

解冻后

44.94 ± 0.96一个

25.35 ± 1.55b

43.28 ± 4.94一个

**

静态运动 (%)

新鲜的

21.74 ± 1.26b

29.44 ± 3.21一个

20.81 ± 2.02b

**

解冻后

38.12 ± 1.11b

49.52 ± 3.16一个

32.02 ± 7.08b

**

表 2。基因型对新鲜和解冻后精液活力的影响（平均值±标准差）。

同一行内不同上标的均值差异显着（p < 0.05），**（p < 0.01）；NS= 不显着（p > 0.05）；签名。= 显着。

公牛队

弯曲的尾巴

卷尾

DMR

远端液滴

近端液滴

红吉大港牛

4.56±0.23

0.49 ± 0.04b

1.35 ± 0.11b

2.79 ± 0.23一个

55.93 ± 1.59

BLRI 牛品种 1

5.89±0.75

1.01 ± 0.22一个

2.26 ± 0.28一个

1.60 ± 0.28b

52.42 ± 4.03

蒙希甘杰牛

5.26±0.87

0.56 ± 0.11b

1.75 ± 0.25抗体

1.32 ± 0.23b

54.16 ± 4.15

显着性水平

NS

**

**

**

NS

表 3。基因型对新鲜精子形态的影响（平均值±标准差）。

同一列内不同上标的均值差异显着（p < 0.05），**（p < 0.01）；NS = 不显着（p > 0.05）；签名。= 显着；DMR = 远端中片反射。

参数/公牛

红吉大港牛

BLRI 牛品种 1

蒙希甘杰

牛

签名。等级

VAP (微米/秒)

新鲜的

143.99 ± 4.15

156.68 ± 3.08

145.15 ± 27.10

NS

解冻后

107.25±8.85

96.04 ± 0.78

121.82 ± 20.09

NS

VSL (微米/秒)

新鲜的

128.50 ± 5.53

139.18 ± 3.83

137.13 ± 28.12

NS

解冻后

90.46 ± 7.12

69.00 ± 1.48

107.42 ± 22.32

NS

VCL (微米/秒)

新鲜的

232.21 ± 23.59

256.06 ± 3.41

208.28 ± 54.84

NS

解冻后

188.62 ± 12.97

179.8 ± 1.41

186.92 ± 27.91

NS

力量 (%)

新鲜的

88.35 ± 3.45

89.07 ± 0.38

93.73 ± 1.33

NS

解冻后

84.19 ± 2.33

73.21 ± 1.91

84.66 ± 5.63

NS

林 (%)

新鲜的

58.57 ± 6.63

56.20 ± 2.13

69.46 ± 6.73

NS

解冻后

50.37 ± 1.59

37.79 ± 1.00

54.70 ± 5.75

NS

ALH (微米)

新鲜的

8.33±1.62

9.53±0.78

6.83 ± 1.97

NS

解冻后

8.84±0.63

10.05±0.80

8.10 ± 0.52

NS

BCF (赫兹)

新鲜的

34.66 ± 4.97

32.96 ± 2.52

35.89 ± 3.36

NS

解冻后

25.77 ± 1.73抗体

20.19 ± 0.82b

32.92 ± 3.42一个

**

表 4。基于总活动精子的 RCC、BCB1 和 Munshiganj 公牛的新鲜和冷冻精子的精子运动学平均值 (± SD)。

VAP：平均路径速度，VSL：直线速度，VCL：曲线速度，STR：直线度，LIN：线性度，ALH：横向头部位移幅度和 BCF：差拍交叉频率。同一行内不同上标的均值差异显着（p < 0.05），**（p < 0.01）；NS= 不显着（p > 0.05）；签名。= 显着。

3.5. 冷冻精液生产

计算了来自 RCC、BCB 1 和 Munshiganj 公牛的每次射精的平均冷冻精液剂量数。基因型之间没有发现显着差异，尽管可以从 Munshiganj 公牛 (394.34 ± 127.95) 然后是 RCC (349.01 ± 120.91) 和 BCB 1 公牛 (331 ± 98.99) 产生更多数量的剂量/射精。

NS = 无意义。

图 3。RCC、BCB1 和 Munshiganj 公牛的生育率 (%)。

3.6. 生育力评估

图 3显示了三种精液基因型 AI 后的比较生育率。不同基因型的生育率没有差异（p > 0.05），但最高值出现在 RCC（62.06 ± 1.94）公牛（图 3）。

4。讨论

牛精子在雌性生殖道中经历不同的挑战才能到达受精部位。只有具有可接受的运动性和活力的形态正常的精子才能参加比赛，其中只有一个精子最终赢得比赛。因此，新鲜和冷冻精液的质量对于达到可接受的受孕率非常重要。

在本实验中，RCC、BCB1和Munshiganj公牛的新鲜精液体积和浓度分别为4.10-4.93 ml和1481.60-166960万/ml。Holstein-Friesian × Zebu、Sahiwal × Zebu、Sindhi × Zebu 和 Red Chittagong Bull 的精液体积和浓度平均值分别为 5.81 ± 0.16ml 和 1115.97 ± 1608 万/mm 3 [ 27 ]。纯种BCB1、Limousin cross、Charolaise cross、Simmental cross和Brahman cross的平均精液量和浓度分别为4.79±0.65、6.62±0.09、6.80±0.05、6.85±0.07、6.71±0.30和800至17.75亿/mm3[ 28 ]。发现 Munshiganj 公牛的精液量和浓度分别为 4.273 ± 0.54 ml 和 1796 ± 12229 万/ml [ 29]。不同品种的精液量和浓度存在差异，这种差异可能归因于年龄、品种、营养状况、地理位置、一年中的季节、精液采集程序的方法和采集频率的差异 [ 30 ] [ 31 ] . 公牛精子的浓度范围为 800 - 20 亿/mm 3 [ 30 ]。水牛的精子浓度随着动物年龄的增加而显着增加 [ 32 ]。然而，本实验中发现的精液体积和浓度范围与现有文献 [ 30 ] [ 32 ] 一致] 和本地牛基因型产生的精液数量和浓度几乎相似。

哺乳动物精子的运动性是一个重要特征，因为精子必须游过雌性生殖道才能与输卵管中的卵母细胞结合以受精并随后产生可行的受精卵。在该实验中，发现 Munshiganj 公牛精子的新鲜和冷冻精液的总和静态活力显着更高，其次是 RCC 和 BCB1。然而，在新鲜精液中，尽管基因型之间的进行性运动几乎相似（p > 0.05），但在冷冻精液中，基因型之间的进行性运动差异显着（p <0.05）。冷冻后，BCB1 精液中观察到显着降低的进行性运动，这可能是由于 BCB1 公牛的年龄较高（4-8 岁）。发现相对较低的总初始质量运动 (61.25% - 64.38%) [ 34] 来自 BCB1 公牛，但迄今为止尚未发现 BCB1 基因型冷冻精液质量的公开记录。新鲜与解冻后的 Munshiganj 精液的总、渐进、静态和缓慢运动分别为 (84.69 ± 4.28 vs. 52.97 ± 3.13)、(72.53 ± 2.91 vs. 43.71 ± 1.57)、(15.31 ± 4.28 vs. 47.03 ± 3.13)和 (1.23 ± 0.60 vs. 0.58 ± 0.18) [ 29 ]。RCC公牛新鲜和冷冻精子的平均质量活力分别在55.85% - 64.31%和44.50% - 53.50%之间[ 35 ]。红吉大港公牛的新鲜精子活力为 62.12 ± 0.97% [ 27 ]。牛新鲜精液的平均活力为 63.3%，范围为 50% - 80% [ 36]。在本实验中，与 RCC 和 Munshiganj 相比，Munshiganj 公牛在新鲜精液中的总精子和逐渐运动精子的百分比更高，而 BCB 1 精液的冷冻性比 RCC 和 Munshiganj 精液差。这种精液质量和可冷冻性的差异可能是由基因型、动物年龄、气候和管理引起的 [ 36 ]。

形态异常的精子无法通过女性生殖道的恶劣环境，最终可能无法到达受精部位。特别是如果精子亚群具有较高的尾部畸形，则它们不能以直线运动通过较高粘性环境游入子宫。在该实验中，三种基因型的公牛表现出不同的形态畸形，而卷尾、远端侧臂反射 (DMR) 和远端液滴变化显着 (p < 0.01)。RCC 公牛的形态异常较低，其次是 Munshiganj 和 BCB1 公牛。已建议正常可育公牛的精子总异常不超过 20%，个别头部、中段和尾部异常不超过 10% [ 30]。本实验尾部和中段异常均在正常范围内。压力状况与精子质量异常有关，因为产生较高的 ROS 可能通过结构和功能变化导致细胞损伤 [ 37 ]。气候胁迫对 Murrah 水牛公牛的弯尾、卷尾、远端水滴和远端中片反射百分比有显着影响 [ 38 ]。在这个实验中，所有三种基因型的公牛都被保持在统一的饲养和管理实践中，因此差异可能是由于基因型。尽管与基因型无关，精子的形态存在显着差异，但它们的值仍在正常范围内，适合育种目的。

精子活力与精子运动学有关，一般来说，高活力精子在 CASA 中表现出较高的 VAP、VSL、VCL、STR 和 LIN。精子运动学在基因型之间没有显着差异，但在 Munshiganj 公牛身上观察到更高的运动学值。一般来说，在收集到解冻后阶段，所有三种基因型的精液的运动特征都有所降低。这种减少可能是由于精液稀释前的保持时间和冷冻前的平衡时间以及冷冻期间的压力[ 39 ]。在 Mithun 公牛中，发现平均 VCL、VSL 和 VAP 为 188.83 ± 4.65、89.77 ± 3.49 和 118.58 ± 3.72 µm/s [ 40 ]。荷斯坦-弗里西亚公牛的运动学值分别为 VCL、VSL 和 VAP，分别为 193.93 ± 71.50、90.69 ± 40.60 和 111.37 ± 40.97 µm/s [41 ]。在这项研究中，观察到的所有三种基因型的运动学值均高于 Mithun 和 Holstein-Friesian 公牛，这种变化可能是由于基因型差异或 CASA 设置的差异。Munshiganj 公牛可以生产更多数量的冷冻秸秆，然后是 RCC 和 BCB 1。这些信息将有助于在 AI 中心建立和规划，以估计每个基因型的年度冷冻精液产量。然而，这种生产效率将在很大程度上因采集间隔、季节变化、冷冻效率和公牛管理而异。

AI后生育率的基因型之间没有显着差异。虽然 Munshiganj 公牛精液解冻后的活力优于 RCC 精液，但 RCC 精液的生育率更高。这可能是由于 RCC 奶牛的繁殖状况比 Munshiganj 奶牛高，因为 RCC 精液用于对 RCC 奶牛进行授精，而 Munshiganj 公牛精液在 Munshiganj 奶牛中受精。相反，BCB1 的进行性运动显着低于 RCC 和 Munshiganj 精液，但它们的生育力没有显着差异，这可能是由于 BCB 1 的 AI 使用了双倍的稻草。 Sahiwal 公牛的不归还率当在 Pabna 奶牛中进行 AI 时，范围为 57.16% - 70.90% [ 42]。受孕是一门复杂的科学，很大程度上取决于精液处理、精子沉积数量、授精部位、AI 工人的效率、精液质量、受精状态、公牛效应和 AI 时间 [ 43 ]。精子活力与其能量状态有关[ 5 ]，具有高前向运动能力的精子有更多的受精机会[ 44 ]。然而，据报道，精子活力和动力学参数不能成为可靠​​的生育指标 [ 45 ]。因此，本研究的变异可能是由于精液处理、基因型、女性生殖健康等因素造成的。然而，在这个实验中，无论基因型如何，都达到了可接受的 AI 后不返回率。

5. 结论

对 RCC、BCB1 和 Munshiganj 公牛的新鲜和冷冻精液进行精液质量和生育力评估。无论公牛的新鲜和冷冻精液质量有何差异，它们都适用于具有相当高生育率的人工授精。在本实验条件下，RCC 公牛的精液质量优于 BCB1 和 Munshiganj 公牛。

致谢

作者非常感谢孟加拉国家畜研究所为开展这项研究提供的实验室和资金支持。

笔记

*作者同等贡献。

#通讯作者。

利益冲突

作者声明与本文的发表没有利益冲突。

参考

[ 1 ] Majid, MA, Nahar, TN 和 Jalil, MA (1992) 孟加拉国家畜改良育种。第四届全国小儿创伤会议论文集，印第安纳波利斯，1992 年 9 月 24-26 日，169-181。

[ 2 ] Hossain, MM, Bhuiyan, MSA, Bhuiyan, AKFH 和 Hanotte, O. (2005) Red Chittagong-Indigenous Cattle Genetic Resource with Promise in Bangladesh。AHAT/BSAS 国际会议论文集，孔敬，2005 年 11 月 4-18 日，82-83。

[ 3 ] Verstegen, J.、Iguer-Ouada, M. 和 Onclin, K. (2002) 男科研究和兽医实践中的计算机辅助精液分析仪。畜种学, 57, 149-179。

[ 4 ] Moohan, JM, Winston, RML 和 Lindsay, KS (1995) 男科：2'-脱氧腺苷对体外人类精子活力和过度活化的可变影响。人类生殖，10，1098-1103。

[ 5 ] Quintero-Moreno, A.、Rigau, T. 和 Rodrıguez-Gil, JE (2004) 回归分析和活动精子亚群结构研究作为改进公猪精液质量分析的工具。畜种学, 61, 673-690。

[ 6 ] Peris, SI, Morrier, A., Dufour, M. 和 Bailey, JL (2004) Ram Semen 的冷冻保存促进精子 DNA 损伤：精子男科参数与精子染色质结构测定之间的关系。男科杂志，25, 224-233。

[ 7 ] Aitken, RJ, Best, FS, Richardson, DW, Djahanbakhch, O., Mortimer, D., Templeton, AA 和 Lees, MM (1982) 不明原因不孕症的精子功能分析：常规标准、运动特征和施肥能力。生育与不育，38, 212-221。

[ 8 ] Mortimer, D., Pandya, IJ 和 Sawers, RS (1986) 体外人类精子活力特征与精子穿透人宫颈粘液的关系。复制，78，93-102。

[ 9 ] Bompart, D.、García-Molina, A.、Valverde, A.、Caldeira, C.、Yániz, J.、de Murga, MN 和 Soler, C. (2018) CASA-Mot 技术：结果如何受帧速率和计数室。生殖、生育和发育，30, 810-819。

[ 10 ] Yata, VK, Gangwar, DK, Sharma, V., Dubey, SK, Yadav, SK, Choudhary, S. 和 Mohanty, AK (2020) Karan Fries 牛的精液分析和精子特征。动物生殖科学，212，文章 ID：106250。