动物产生的抗菌肽和化学物质对肝微粒体酶CYP450的影响

摘要：除了限制在饲料中使用抗生素作为促生长物质外，细菌、真菌和酵母菌等多重耐药病原体的问题已引起人们的关注，以寻找替代来源，而不是具有抗菌活性的天然产物等常规抗生素。很多兴趣和研究都集中在使用从动物分泌物和一些昆虫毒液中提取的天然抗菌肽和化学物质，因为如果它们与它们的混合物组合使用，它们对病原体具有较低的抗性和较高的协同作用，具有抗菌活性。本文从蜜蜂毒液中提取一些抗菌肽并用酵母酿酒 酵母进行表达将讨论从长颈鹿中提取的抗菌化学物质，以及它们对肝微粒体酶 CYP450 的抑制作用，还将讨论其使用光密度分析技术对发根农杆菌、 黑曲霉、白色念珠菌和大肠杆菌等微生物的活性。然后将确定它们的最小抑制浓度 (MIC) 以及 IC 50 以测量抑制生物功能的效力，使用诸如 Gene5、graph pad prism 和克隆管理器之类的程序以及测试动物中提供的一些化学物质的抗菌活性分泌物。

关键词

抗菌素, CYP450 ,抗菌肽

一、简介

1.1。细胞色素 P450 酶

细胞色素 P450 基团是含有负责第一阶段氧化代谢反应的酶的血红素；它们不参与电子传递（细胞色素 b 和 c）。一个复杂的微粒体酶家族（单加氧酶）的成员存在于内质网中，可对化合物进行解毒 [ 1 ]。

1.2. 蜜蜂肽

以前有研究表明，总核糖核酸已从蜂王毒腺中的脱氧核糖核酸转录并克隆到包涵体 pPR322 [ 2 ] 的 PSTI 网站中，因为那里有极其特化的细胞，可制造大量多肽并发挥重要作用。在有机化学分析中的作用；有多种资源可用于纯化特定 mRNA，这些资源已用于学习无细胞系统中的大分子合成，这些资源被认为是构建体 DNA 酸克隆的起始材料，这可能被认为是纯化和分离基因的开始目的。蜂毒肽的合成是蜂毒肽（图1），由二十六个氨基酸组成[ 3] 这种裂解肽首先通过几个途径步骤从称为前蜂毒蛋白前体的主要前体中分离出来，然后使用不同的酶将其重新加工成蜂毒蛋白前体（图 1）。

长颈鹿产生的这些化学物质可能以完全不同的方式被检测到。通过气相色谱/质谱分析分析雄性和雌性长颈鹿毛发样品的二氯甲烷或 DMSO，产生 2 种化学物质，即吲哚和 3-甲基吲哚（图 2），这些化学物质对长颈鹿的强烈气味有很大影响。替代的化学提取物是对甲酚（图 2）、庚醛、辛醛、壬醛、苯甲醛、辛烷、十六碳烯酸和十四烷酸。

图 1。蜂毒肽的化学结构。

图 2。长颈鹿毛发的主要化学物质吲哚、粪臭素和对甲酚的化学结构。

1.3. 细胞色素 P450s 活动

多种药物医疗可能是当今药物治疗中的一个难题，即药物-药物相互作用的晶体整流器被极大地放大，因此它涉及药物分析和开发。由于药物-药物相互作用 [ 4 ] [ 5 ]，由于 CYP450 的代谢被认为是通过代谢和排泄过程消除药物的主要途径，一些药物作为特非那定和米贝拉地尔从市场上撤出。

CYP450 的抑制可能是 CYP 活性位点（如人工血红素铁和 CYP 蛋白的底物结合区）的竞争，因此当耗尽时，可以在体内和体外利用 CYP 酶的活性。作为不可逆抑制剂，大多数化合物通过不可逆结合来抑制 CYP 发挥作用，或者它们通过 CYP 重生到最重要的高能物质上，该高能物质不可逆地与加速器中心的位置结合，导致蛋白质活性永久丧失。

CYP 催化的反应通过重塑为高能物质完成了蛋白质活性的不可逆损失，因此它可以被认为是基于机制的抑制，在这种情况下，反应物质与 CYP 的血红素分子形成稳定推进，称为类似的不可逆抑制或不可逆地共价修饰 CYP 蛋白。

通常，在这些情况中的每一种情况下，都不能通过将CYP物质从反应中撤出来恢复蛋白质活性。与此不同的是，活性物质使 CYP 失活导致对药物药理学的未来影响的可逆抑制包括吸收、分布、代谢和排泄过程，因为失活的促进剂被新合成的 CYP 酶取代。

尽管大部分药物-药物相互作用是通过可逆抑制发生的，但不可逆抑制剂并不是最流行的，并且在药物制剂和开发中被避免使用。由于毒性和药物-药物相互作用以及药物-食物相互作用的考虑，它们在药物开发方法中永远失败，因此有必要在药物开发的早期掌握药物-药物相互作用以及不可逆抑制剂，然后才能获得更多有价值的信息。资源被用于那些不太可能转移到医院或诊所的化合物。

尽管许多严重问题是由药物制剂中 CYP 的不可逆抑制引起的，但可逆和不可逆的区分并不是 CYP 筛选方法的主要问题，因为哺乳动物颗粒酶中 CYP450 的不可逆抑制是已知的液体自然过程（LC ) 或 LC-MS/MS 分析标志物的代谢物。这种费力且高价值的测定限制了处理大量化合物的灵活性，并且在整个药物开发过程中一直是筛选不可逆抑制剂的一大障碍，但是最近，药物发现的合成和药物筛选导致大量候选药物。

筛选不可逆抑制剂的更高方法的要求变得非常明确，在本文中，我们研究了从长颈鹿毛发中提取的化学物质吲哚、烷基吲哚、对甲酚和这 3 种化学物质的混合物之间的抑制灵活性和结果以 DMSO 对三种形式的肝颗粒酶 CYP1A1、CYP1A2 和 CYP1B1 进行伤害，以逐一区分每种化学物质的结果，并筛选它们组合的协同作用，以稀释对甲酚的肾毒性作用并降低抗菌素耐药性恒定的时间。

2。材料和方法

2.1。CYP450 协议

使用微粒体 P450 用于荧光底物的典型参数是通过调整每 100 µL 体积、黑色 96 孔板和 PH 7.4 的 100 mM 磷酸钾缓冲液的条件测定。再生系统由冷冻溶液A和溶液B

再生系统溶液 A 原液由含有 26.13 mM NADP +和 65.77 mM 葡萄糖-6-磷酸盐的 65.42 mM 氯化镁溶液保存。在每孔 NADP + 1.3 mM、3.3 mM 氯化镁缓冲液中的 6-磷酸葡萄糖 3.3 mM。

再生系统溶液 B 储备 5 mM 柠檬酸三钠每毫升含有 40 个单位的葡萄糖 6-磷酸脱氢酶。在每口井中加入 0.04 单位的葡萄糖 6-磷酸脱氢酶，缓冲液为 50 µM 柠檬酸钠。

大体情况：

1) 最终孔底物浓度为2~15 µM；

2) 根据 P450，最终孔 P450 体积的浓度为 0.5 µL 至 4 µL；

3) 溶剂最终孔的浓度目标是保持在 0.5%，但也可以向 1% 方向发展。通常使用乙腈/DMSO 进行底物/抑制剂测试；

4）反应温度保持在37℃，30℃为佳，可接受；

5) 根据 P450 和设置条件，这些反应从 20 分钟到 1 小时是线性的；

6) 通过在 100 mM 磷酸钾缓冲液 PH 7.4 中稀释所需体积的总体积 50 µL 来制备所需倍数的 P450 混合物，然后分配 50 µL/孔，然后将预混液添加到每个孔中。

预混标准（表 1）：

25 µL 200 mM 磷酸钾缓冲液 PH 7.4 加满至最终体积为 50 µL 水：

5 µL 溶液 A；

1 µL 溶液 B。

P450

基质

最终孔 [底物] µM

每孔 P450s µL 的体积

100 mM K 磷酸盐 µL 的体积

CYP1A1

侵蚀

5

1

49

CYP1A2

中电联

15

1

49

CYP1B1

侵蚀

5

1

49

表 1。每个反应的测定参数显示 P450 家族、底物名称、最终孔底物 µM、P450s µL/孔的体积和 100 mM 磷酸钾 µL 的体积。

底物通常在 0.1 µL 到 0.5 µL/孔之间，通常固定体积以避免 P450 溶剂破坏。

2.2. CYP抑制

研究 CYP450 的抑制作用非常重要，因为它可以测量化学物质对肝酶的影响并筛选肝功能的代谢；它还可用于研究药物-药物相互作用、药物-食物相互作用、药物-赋形剂相互作用和药物-基因相互作用。

2.3. CYP1A2 检测

通过取 100 mM 甲酚的 1/50 稀释、500 mM 吲哚的 1/250 稀释和 250 mM 粪臭素的 1/125 稀释来制备吲哚、粪臭素和对甲酚的混合物，以获得混合物组成：

在 980 µL 10% DMSO 中加入 20 µL 甲酚；10 µL 在 2490 µL 的 10% DMSO 中；1240 μL DMSO 中含有 10 μL 粪臭素。

准备库存溶液由 CYP1A2 与底物 CEC（3-氰基 7-ethocxycoumarin）混合，0.5 M 与 PH 7.4 的磷酸钾缓冲液。将含有甲酚的原料放在前三列，吲哚在接下来的三列中，粪臭素在接下来的三列中，并在最后三列中混合。将 DMSO（二甲基亚砜）放入所有孔中。

在一个透明的 96 孔板中，将甲酚、吲哚、粪臭素和混合物分别放入前四个孔中，并像以前一样从第一个原料中插入 200 µL 2 mM 原液，然后将 100 µL 的 100 µL 10% DMSO 转移到第二个原料，然后将 100 µL 转移到 100 µL DMSO 中到第三个原料中，然后将 20 µL 从第三个原料转移到带有 180 µL DMSO 的第四个原料中，然后将 100 µL 在 100 µL 的 10% DMSO 中转移到第五个原料中然后将 100 µL 转移到 100 µL DMSO 中，然后在第 7 个原料中加入 20 µL 到 180 µL 10% DMSO 中，然后在第 8个原料中转移 100 µL 到 200 µL DMSO 中。

在最后一个原料中加入 200 µL DMSO 作为阳性对照，并添加 0.5 M tris 碱乙腈作为杀死和终止溶液，该溶液被认为是阴性对照，由 80% 乙腈和 20% tris OSM 组成，未经过 PH 处理作为纯浓度乙腈为 10 mM（表 2）。

在培养皿中加入由 NADPH 葡萄糖-6-磷酸盐氯化镁和酶溶液 B 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶柠檬酸三钠组成的缓冲液 A 以在培养皿中形成预混液，该缓冲液包括：

20 µL CEC (cyano-7-ethocxycoumarin);

3250 µL 磷酸钾；

650 µL 溶液 A；

130 µL 溶液 B；

2450 µL 蒸馏水。

轻轻混合它们，将 50 μL 移液器移至 96 黑色孔板中的每个孔中，然后使用 gen5 软件测量抑制率（图 3）。

威尔斯

稀释

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

甲酚

吲哚

粪臭素

混合

一个

库存

100微米

100微米

100微米

2000 微米

2000 微米

2000 微米

2000 微米

2000 微米

2000 微米

2000 微米

2000 微米

2000 微米

乙

½

50微米

50微米

50微米

1000 微米

1000 微米

1000 微米

1000 微米

1000 微米

1000 微米

1000 微米

1000 微米

1000 微米

C

½

25微米

25微米

25微米

500微米

500微米

500微米

500微米

500微米

500微米

500微米

500微米

500微米

D

1/10

2.5 µM

2.5 µM

2.5 µM

50微米

50微米

50微米

50微米

50微米

50微米

50微米

50微米

50微米

乙

1/2

1.25 µM

1.25 µM

1.25 µM

25微米

25微米

25微米

25微米

25微米

25微米

25微米

25微米

25微米

F

1/2

0.625 µM

0.625 µM

0.625 µM

12.5 µM

12.5 µM

12.5 µM

12.5 µM

12.5 µM

12.5 µM

12.5 µM

12.5 µM

12.5 µM

G

1/10

62.5 海里

62.5 海里

62.5 海里

1.25 µM

1.25 µM

1.25 µM

1.25 µM

1.25 µM

1.25 µM

1.25 µM

1.25 µM

1.25 µM

H

200 µL DMSO

10 毫米乙腈

表 2。显示其浓度的 96 孔板浓度的内容方案。

图 3。解释图显示了CYP1A1的抑制等级，远点表示低抑制，闭合或近点表示高抑制，阴性对照使用终止溶液乙腈tris产生的平点。

将您的数据传输到 Excel 表中，并将与混合相关的数据划分为 3，以获得组合中每种化学物质的抑制效果。计算阳性和阴性对照值的平均值、标准偏差和标准误差。按规律计算抑制百分比：

抑制百分比 = 100 - ((抑制量/阳性对照的平均值) × 100)。

2.4. CYP1A1 检测

1) 在一个新的透明 96 孔板中，将甲酚、吲哚、粪臭素和混合物分别放入前四个孔中，并像以前一样从第一个原料中插入 200 µL 2 mM 原液，然后将 100 µL 转移到 100 µL 10% DMSO 中进入第二个原料，然后将 100 µL 转移到 100 µL DMSO 中到第三个原料中，然后将 20 µL 从第三个原料转移到带有 180 µL DMSO 的第四个原料中，然后将 100 µL 在 100 µL 中的 10% DMSO 中转移到第五个原料然后将 100 µL 转移到 100 µL DMSO 中，然后在第六个原料中加入 20 µL 到 180 µL 10% DMSO 中，然后在第8个原料中转移 100 µL 到 200 µL DMSO 中。

2) 在接下来的四个孔中，用 60 µL 水和 80 µL 200 mM KPI 稀释，这是一种磷酸盐缓冲液，由 0.6 ml 1M K2HPO4 + 9.4 ml 1 M KH2PO4 混合并用无菌超纯溶液制成 50 ml水。移取第一列中的 20 µL 甲酚，将它们放在第 6列中，从第 7 列中的第二列中吸取 20 µL 吲哚，从第8 列中吸取第三列中的 20 µL粪臭素，从第4列中吸取 20 µL 混合物在第 9列（表 3）。

按 1:130 的比例从 CYP 1A1 和 KPI 准备主混合。

1 µL CYP 1A1 * 130 = 130 µL；

9 µL 关键绩效指标 * 130 = 1170 µL。

在 Eppendorf 管中，通过在黑色 96 孔板的每个孔中混合 1170 μL 的 100 mM KPI 和 130 μL 的 CYP 1A1 和移液器 10 μL 来制备 CYP 混合物。

注意：在每口井中，先添加 KPI，然后再添加水。

在黑色 96 孔板中：

取第 6根透明柱 40 µL 转入黑色第 1、2 和 3 列，取第 7根透明柱 40 μL 转入黑色第 4、5 和 6 列，取第 8根透明柱 40 μL柱并转移到黑色柱7、8和9中，取第9根透明柱40 µL转移到黑色柱10、11和12中。

在右移液器的最后 6 口井中，将 75 μL 乙腈停止溶液加入磷酸钾缓冲液和 CYP1A1 作为阴性对照。在培养皿中准备主混合物，其中包括：

3250 µL 200 mM 磷酸钾缓冲液；

70 µL 1mM 库存 EROD 底物（7-乙氧基试卤灵 O-去乙基化）；

650 µL 溶液 A；

130 µL 溶液 B；

2405 µL 蒸馏水。

轻轻混合它们，将 50 μL 移液到 96 黑色孔板中的每个孔中，然后使用 gen5 软件测量抑制率。将您的数据传输到 Excel 表中，并将与混合相关的数据划分为 3，以获得组合中每种化学物质的抑制效果。计算阳性和阴性对照值的平均值、标准偏差和标准误差。按规律计算抑制百分比：

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

一个

甲酚

吲哚

粪臭素

混合

KPI+水+甲酚

KPI+水+吲哚

KPI+水+粪臭素

KPI+水+混合

乙

甲酚+DMSO

吲哚+DMSO

粪臭素+DMSO

混合+DMSO

KPI+水+甲酚

KPI+水+吲哚

KPI+水+粪臭素

KPI+水+混合

C

甲酚+DMSO

吲哚+DMSO

粪臭素+DMSO

混合+DMSO

KPI+水+甲酚

KPI+水+吲哚

KPI+水+粪臭素

KPI+水+混合

D

甲酚+DMSO

吲哚+DMSO

粪臭素+DMSO

混合+DMSO

KPI+水+甲酚

KPI+水+吲哚

KPI+水+粪臭素

KPI+水+混合

乙

甲酚+DMSO

吲哚+DMSO

粪臭素+DMSO

混合+DMSO

KPI+水+甲酚

KPI+水+吲哚

KPI+水+粪臭素

KPI+水+混合

F

甲酚+DMSO

吲哚+DMSO

粪臭素+DMSO

混合+DMSO

KPI+水+甲酚

KPI+水+吲哚

KPI+水+粪臭素

KPI+水+混合

G

H

表 3。显示其稀释剂的透明 96 孔板的内容方案。

抑制百分比 = 100 - ((抑制量/阳性对照的平均值) × 100)。

2.5. CYP1B1 检测

在一个新的透明 96 孔板中，将甲酚、吲哚、粪臭素和混合物分别放入前四个孔中，并像以前一样从第一个原料中插入 200 µL 2 mM 原液，然后将 100 µL 的 100 µL 10% DMSO 转移到第二个原料，然后将 100 µL 转移到 100 µL DMSO 中到第三个原料中，然后将 20 µL 从第三个原料转移到带有 180 µL DMSO 的第四个原料中，然后将 100 µL 在 100 µL 的 10% DMSO 中转移到第五个原料中然后将 100 µL 转移到 100 µL DMSO 中，然后在第 7 次未加工中加入 20 µL 到 180 µL 10% DMSO 中，在第 8次未加工中转移 100 µL 到 200 µL DMSO 中。

在接下来的连续四个孔中，用 60 µL 水和 80 µL 200 mM KPI 稀释，并从第一列中吸取 20 µL 甲酚，将它们放在第 6列中，从第 7列中的第二列中吸取 20 µL 吲哚，20 µL 粪臭素从第 8列的第3 列和第9列的第4 列的 20 µL混合物。

按 1:130 的比例从 CYP 1B1 和 KPI 准备主混合。

1 µL CYP 1B1 * 130 = 130 µL；

9 µL 关键绩效指标 * 130 = 1170 µL。

在 Eppendorf 管中，通过在黑色 96 孔板的每个孔中混合 1170 μL 的 100 mM KPI 和 130 μL 的 CYP 1B1 和移液器 10 μL 来制备 CYP 混合物。

在黑色 96 孔板中：

取第 6根透明柱 40 µL 转入黑色第 1、2 和 3 列，取第 7根透明柱 40 μL 转入黑色第 4、5 和 6 列，取第 8根透明柱 40 μL柱并转移到黑色柱7、8和9中，取第9根透明柱40 µL转移到黑色柱10、11和12中。

在最后一个原始 H 中，将前 6 口井作为阳性对照，在接下来的 6 口井中移液器 70 μL 乙腈终止溶液以杀死酶作为阴性对照。

在培养皿中准备主混合物，其中包括：

3250 µL 200 mM 磷酸钾缓冲液；

70 µL 1mM 库存 EROD 底物；

650 µL 溶液 A；

130 µL 溶液 B；

2405 µL 蒸馏水。

轻轻混合它们，将 50 μL 移液到 96 黑色孔板中的每个孔中，然后使用 gen5 软件测量抑制率并等待约 20 分钟。将您的数据传输到 Excel 表中，并将与混合相关的数据划分为 3，以获得组合中每种化学物质的抑制效果。计算阳性和阴性对照值的平均值、标准偏差和标准误差。计算抑制百分比。

2.6. CYP450s的统计分析

使用图形垫插入 excel 表中的数据以绘制曲线，说明相对荧光单位 (RFU) 与 µM 浓度的关系，显示这些化学物质对微粒体酶 CYP 的抑制作用。

3. 结果

3.1。CYP450 抑制

3.1.1。CYP1A2 检测

下表中获得的结果说明了最终孔浓度（单位为 µM）、抑制值和抑制百分比，根据公式：

抑制百分比 = 100 - ((抑制量/阳性对照的平均值) × 100)。

CYP1A2 抑制试验的结果如下所示（表 4）：

对于阳性对照，平均值 = 21,402.2222，标准偏差 = 1551.13183 和 SEM = 517.043942。

对于阴性对照，平均值 = 791.666667，标准偏差 = 51.0718448 和 SEM = 17.0239483。

3.1.2。CYP1A1 检测

CYP1A1 抑制试验的结果如下所示（表 5）：

对于阳性对照，平均值 = 98.56482，标准偏差 = 11.3913778 和 SEM = 4.65051051。

对于阴性对照，平均值 = 0.092593，标准偏差 = 0.03950135 和 SEM = 0.01612636。

混合

斯卡托尔

吲哚

甲酚

3

2

1

3

2

1

3

2

1

3

2

1

最终井浓度 µM

最终井浓度 µM

5318.667

4681

4539

33.3333

9732

9219

9036

21,620

19,799

19,719

23,444

25,254

21,844

100

一个

5478.666

5016.666

5277.6666

16.666667

11,598

10,904

10,984

26,651

26,897

25,287

20,599

19,953

20,252

50

乙

6263.3333

5739.333

5716.333

8.3333333

14,373

13,364

13,603

18,787

21,426

19,952

20,198

19,937

19,861

25

C

6737.333

6609

6342

0.8333333

20,090

19,131

19,380

20,399

23,511

20,366

19,967

23,474

20,639

2.5

D

6952

6713.666

6520

0.41666667

19,547

18,686

18,513

19,938

20,129

20,409

20,338

23,262

20,087

1.25

乙

6959

12451

6426.333

0.208333

20,142

18,403

18,904

19,660

21,171

21,567

37,439

20,407

24,135

0.625

F

7120.333

7254.333

6847

0.02083333

20,435

20,043

19,954

19,724

20,066

20,598

20,725

21,276

21,016

0.0625

G

21,061

20,729

20,109

20,041

23,397

20,565

20,709

24,563

21,446

位置

H

850

770

755

否定

75.149

78.12844

78.79192

54.52809

56.92503

57.78009

−1.0175475

7.49091475

7.8647

−9.54003

−17.9971

−2.06417

抑制百分比

表 4。在甲酚、吲哚、粪臭素和混合物的作用下与 CYP450 1A2 相关的抑制值与计算的抑制百分比。

混合

斯卡托尔

吲哚

甲酚

3

2

1

3

2

1

3

2

1

3

2

1

最终井浓度 µM

最终井浓度 µM

35.8

33.77777

33.08796

33.3333

90.21296

96.07407

91.80093

102.0139

90.80556

90.37963

82.51389

85.77315

100

一个

39.2

33.9

31.7

16.666667

95.39352

100.6898

91.7037

88.83111

106.0509

100.8333

92.0092

94.34259

90.50926

50

乙

35.48

33.2

31.9

8.3333333

95.91204

98.28241

93.53704

101.287

100.6435

100.5417

91.35185

95.64352

86.39352

25

C

36.077

36.7685

30.15586

0.8333333

102.3657

102.6204

98.23611

103.9815

100.1852

99.11111

93.05556

82.25463

89.42593

2.5

D

33.375

33.57

32.3

0.41666667

102.6852

97.03241

92.58333

102.3102

96.59259

99.37963

93.00926

94.65741

89.81944

1.25

乙

33.5

33.05

33.9

0.208333

101.1713

99.21296

95.72685

98.14815

100.4491

102.6944

94.46759

90.2963

88.25926

0.625

F

34.3

35.37

35.9

0.02083333

110.9074

111.1898

114.4213

111.5787

107.1343

102.875

93.13889

89.22685

85.0463

0.0625

G

113.5185

105.625

105.032407

95.30093

87.52315

84.38889

位置

H

0.087963

0.0787037

0.0648148

0.083333

0.069444

0.171296

否定

63.67872

65.7304

66.43025

66.18131

8.47347

2.527017

6.862377

−3.4993

7.8722408

8.3043727

16.28464

12.97793

抑制百分比

表 5。在甲酚、吲哚、粪臭素和混合物的作用下与 CYP450 1A1 相关的抑制值与计算的抑制百分比。

3.1.3. CYP1B1 检测

在这种情况下，仅考虑粪臭素抑制值，因为它具有与混合物相当的高抑制效果。

CYP1B1 抑制试验的结果如下所示（表 6）：

对于阳性对照，平均值 = 76,565.5，标准偏差 = 19,608.78 和 SEM = 8005.25148。

对于阴性对照，平均值 = 2456.333，标准偏差 = 899.8417 和 SEM = 367.358832。

3.2. CYP450s的统计分析

对于 CYP1A2，它显示出对粪臭素的高度抑制，因为 IC50 等于 25.85 µM，其范围在 17.6 µM 至 37.95 µM 之间，如下所示（图 4）。

对于 CYP1B1，它显示出对粪臭素的高度抑制，因为 IC50 等于 39.76 µM，其范围在 13.41 µM 至 117.9 µM 之间，如下所示（图 5）。

4。讨论

对于与 CYPs 酶相关的图表，表明粪臭素是 CYP1A2 和 1B1 的抑制剂，根据 Gene5 结果，混合物的抑制百分比远高于与吲哚、粪臭素和甲酚单独相关的抑制百分比，支持它们组合的协同效应。

在这种情况下，粪臭素是更有效的抑制剂，尤其是对 CYP1A2 的抑制剂，因此粪臭素可能是一种针对 CYP1A2 代谢的抗癌药物的抑制剂。

对于化学品，吲哚、粪臭素和甲酚的混合物可用于局部使用，以保护身体免受皮肤病的影响。这种混合物可局部用作贴剂、软膏或乳膏，尤其适用于某些皮肤病。

除了将其用作植物洋葱以驱除感染植物尤其是洋葱的烟曲霉外，如果将这些化学物质用作喷雾剂以驱除苍蝇和蚊子等昆虫，则它们的物理特性可能是有益的。

图 4。GraphPad 以纳米计显示 RFU 与与 CYP1A2 相关的粪臭素的对数。

图 5。GraphPad 以纳米计显示 RFU 与 CYP1B1 相关的粪臭素对数。

混合

粪臭素

09-7月。

微米

21,622.33

20,600

19,865

33.3333

17,509

17,329

11,155

100

一个

23,404

22,651.667

21,550.33

16.666667

31,490

31,915

23,907

50

乙

24,049.33

24,520

21,569.67

8.3333333

43,045

42,182

39,020

25

C

24,120.67

22,125.667

21,917.33

0.8333333

64,660

67,304

67,675

2.5

D

22,126.33

20,139

19,202.33

0.41666667

65,942

60,598

66,521

1.25

乙

17,791.67

16,107.333

15,662.33

0.208333

54,946

49,870

51,702

0.625

F

11,672.33

9542

9345.667

0.02083333

33,246

28,880

35,367

0.0625

G

44,104

65,857

76,067

83,020

92,030

98,315

位置

H 1-6

1848年

1997

1821

3906

3265

1901

否定

H 7-12

71.76

73.09

74.05

77.1

77.367

85.4

抑制百分比

表 6。在粪臭素作用下与 CYP450 1B1 相关的抑制值并与计算的抑制百分比混合。

根据与 CYP450 相关的结果，这些化学物质的抑制作用，尤其是单独或混合的粪臭素，可用于确定与服用这些化学物质与其他会影响其浓度的药物相关的药物-药物相互作用以及药物-疾病相互作用，这在患有不能代谢甲酚的慢性肾病患者中观察到，这种物质对他们是禁忌的。

5。结论

基于这些结果的未来工作，可能会进一步完成His标签克隆，因为一些标签参与肽的活性丧失，并且可以测量光密度以使用N和C末端测量其抑制作用。

酵母的克隆和表达可以进一步使用其他蛋白质肽进行，例如乳铁蛋白和乳转铁蛋白，它们存在于许多哺乳动物物种的乳汁中并具有抗微生物活性。它可以从鲸鱼、骆驼和海豚的乳汁中提取，这取决于它们的疏水性和有助于其渗透到微生物细胞壁的β-折叠。

需要进一步的研究来了解这种组合的整体特性及其对更多微生物的作用及其对肝微粒体酶的抑制作用。

利益冲突

作者声明与本文的发表没有利益冲突。

参考

[ 1 ] Ortiz de Montellano, PR (1995) 细胞色素 P450：结构、机制和生物化学。Kluwer Academic/Plenum Publishers，纽约。

[ 2 ] Vlasak, R., Unger-Ullmann, C., Kreil, G. 和 Frischauf, AM (1983) Nucleotide Sequence of Cloned cDNA Coding for Honeybee Prepromelittin。欧洲生物化学杂志，135、123-126。

[ 3 ] Habermann, E. (1972) Bee and Wasp Venoms: The Biochemistry and Pharmacology of their Peptides and Enzymes are reviewed。科学，177，314-322。

[ 4 ] von Moltke, LL, Greenblatt, DJ, Duan, SX, Harmatz, JS 和 Shader, RI (1994) 特非那定-酮康唑药代动力学相互作用的体外预测。临床药理学杂志，34，1222-1227。

[ 5 ] Griffin, JP (1998) Mibefradil (Posicor) 的退出。药物不良反应和毒理学评论，17, 59-60。